名稱 DNA退火緩沖液(5×) / Annealing Buffer for DNA Oligos (5×)

規格

PH1417-1 | 1mL

試劑組分

試劑(A): Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)----1ml----Store at -20℃

試劑(B): Nuclease-Free Water----5ml----Store at RT

產品簡介

DNA寡核苷酸退火緩沖液(Annealing Buffer for DNA Oligos)簡稱為DNA退火緩沖液，是一種可用于DNA oligo退火的緩沖液，可用于常規的DNA oligo的退火，尤其適合于較難退火的用于RNAi (也稱siRNA)質粒構建的DNA oligo的退火。

Phygene的 Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)能有效避免DNA oligo自身形成發夾結構，并且兩條oligo退火后可以直接和經酶切、純化的質粒連接，轉化后可以得到大量的陽性克隆。該本試劑操作簡單，只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)按照一定比例混合后，置于PCR儀上進行程序降溫，約90min即可完成。

使用說明

操作步驟(僅供參考)：

1、 把待退火的DNA oligo用經的超純水或Nuclease-Free Water配制成50μM， 同時溶解Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)，混勻備用。

2、 按如下退火反應體系操作：

Nuclease-Free Water----40μl

Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)----20μl

DNA oligo A(50μM)----20μl

DNA oligo B(50μM)----20μl

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Tatal 100μl

按照上述順序，依次加入并混勻，如果所用PCR儀沒有加熱蓋，可加入Mineral Oil防止 液體揮發。

3、 按如下PCR儀的退火條件：

步驟 溫度 時間 作用

1 95℃ 2min Oligo充分變性

2 每90s下降1℃,降至25℃ 約90min 程序退火

3 4℃ 長期保存 暫時存放

注1：如果所用的PCR儀不具備下降℃的功能，也可以設置為每90秒下降1℃。

4、退火后可直接用于連接反應，也可以-20℃凍存備用。如果退火結束后打算進行酶切等其它反應，用純化試劑盒進行純化，或者確保退火產物在反應體系中體積不超過5%，以避免Annealing Buffer對后續的酶反應體系的干擾。

注意事項

1、 避免反復凍融，以免效率下降。

2、 該試劑只適合于DNA oligo的退火，不適用于RNA oligo 的退火。

3、 為了您的和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

*Important Note: This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.