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Hot-Start Taq DNA Polymerase

產品簡介：

?碧雲天生產的Hot-Start Taq DNA Polymerase是一種僅當溫度高於45oC時才具有DNA聚合酶活性的Taq DNA Polymerase(簡稱Taq酶)與其可逆抑制劑的混合物，俗稱熱啓動Taq酶或HS Taq酶。使用本產品進行PCR反應時可以在室溫操作，並能有效避免室溫操作時由於普通Taq酶或其它耐熱DNA聚合酶存在活性而導致的非特異性PCR背景。

?碧雲天的Hot-Start Taq DNA Polymerase是Taq酶與其可逆性抑制劑的混合物。該抑制劑可以可逆性地結合於Taq酶活性位點，當溫度低於45oC時，形成非活性的Taq酶和抑制劑的複合物，從而抑制了Taq酶的活性。在常規PCR反應過程中，當溫度升高至45oC或以上時，Taq酶和其可逆性抑制劑解離，從而發揮其正常的DNA聚合酶活性。上述機制使Hot-Start TaqDNA Polymerase僅在加熱到45oC或以上時纔會有酶活性，從而確保了小於45oC時不會發生非特異性的DNA聚合反應，有效降低了PCR的非特異性背景，提高了PCR反應的準確性和精確性。

?常規的DNA分離純化操作，例如PCR純化試劑盒或DNA凝膠回收試劑盒和乙醇沉澱等操作，都能有效去除本產品中的抑制劑，以避免可能的對於後續反應的幹擾。

?Hot-Start Taq DNA Polymerase使用時無需額外的高溫孵育步驟以釋放Taq酶活性。

?Hot-Start Taq DNA Polymerase和普通的Taq DNA Polymerase一樣，可以催化5'至3'方向的依賴於DNA模板的DNA的聚合反應，沒有3'至5'的外切酶活性，最終會導致PCR產物的3'末端產生3'-dA overhangs，即產生帶一個A的3'粘端，可直接用於TA克隆。

圖1. Hot-Start Taq DNA Polymerase的酶活力測定。A. Hot-Start Taq DNA Polymerase (HS Taq)在40oC時，其聚合酶活力被抑制。以M13 mp18 ssDNA (7249nt，電泳顯示約2.2kb)爲模板，添加適量引物後40oC孵育10min，1% Agarose凝膠電泳。圖中可見普通Taq酶在40oC可以發生聚合反應，使DNA條帶延長至電泳呈現的約3.5kb大小，而Hot-Start Taq酶(HS Taq)不能使M13 mp18 ssDNA的鏈發生延長，即其酶活力被抑制。B. Hot-Start Taq DNA Polymerase在常規PCR條件下其活力被釋放，PCR擴增效果和Taq酶一致。

?來源：本產品使用的Taq DNA polymerase爲recombinant Taq DNA Polymerase，通過大腸桿菌表達純化獲得，和純化獲得的天然Taq DNA Polymerase在各方面的性質相同。

?用途：高背景和有非特異性條帶的PCR，高專一性PCR(high-specificity PCR)，高靈敏度PCR，生物芯片分析(microarray analysis)，常規PCR，克隆PCR、TA克隆等，不建議用於螢光定量PCR (qPCR)。

?活性定義：One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 70oC. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 67 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25oC), 6.7 mM MgCl2, 1 mM 2-mercaptoethanol, 50 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]dTTP。

?純度：不含DNA內切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，滿足常規PCR反應要求。

?酶儲存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Nonidet P40, 0.5% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。

?10X Hot-Start PCR Buffer：100 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25oC), 500 mM KCl, 15mM MgCl2, 0.8% (v/v) Nonidet P40。

?失活或抑制：酚氯仿抽提可以使Hot-Start Taq DNA Polymerase失活，加入脫氧膽酸鈉至0.06%，SDS至0.01%，或sarkosyl至0.02%均可以抑制Hot-Start Taq DNA Polymerase。

?本產品用於50微升的PCR反應體系，足夠用於800個反應；用於20微升的PCR反應體系，足夠用於2000個反應。

包裝清單：

保存條件：

-20oC保存。

注意事項：

?由於PCR反應非常靈敏可以擴增目的基因序列超過1000萬倍，在使用Hot-Start Taq Polymerase時請注意避免微量待擴增DNA的污染，並儘量考慮設置不加模板的空白對照以確認是否有待擴增DNA的污染。

?Hot-Start Taq DNA polymerase在PCR過程中每循環的出錯機率約爲2.2×10-5，對於大於1kb的DNA片段的克隆推薦使用出錯機率更低的DNA聚合酶，例如Pfu DNA polymerase、BeyoTaq DNA polymerase等。對於普通的PCR或RT-PCR定性檢測或定量檢測，Hot-Start Taq DNA polymerase是。

?本產品於專業人員的科學研究用，不得用於任何其他用途，不得存放於普通住宅內。

?為了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。