PAEmSphereTM層析填料
mSphereTM-Based Chromatography Media
A new generation of matrix for protein purification offers 3 HIGH (3H)
A New standard and Criteria for Chromatography Media
新一代層析填料 高載量、高流速、高分辨
載量翻倍 無人能出其右 行業(yè)新標準
線性放大有保障 加快工藝開發(fā)速度
Source的性能 低于FF的價格品平民價
mSphereTM微球簡介
mSphereTM微球是與Source相同的層析填料基材，是集高流速、高載量、高分辨率（3H）于一體的新一代蛋白純化填料的基礎(chǔ)材料。
過去二十多年來，聚合物微球得到了極大的發(fā)展并成功應(yīng)用于生物物質(zhì)分離和純化。PAE開發(fā)的聚合物微球，簡寫為mSphereTM,是用聚丙烯酸酯制備的層析介質(zhì)。與傳統(tǒng)的多糖基基材相比，聚合物微球有多方面有點。
PAE生產(chǎn)的用于生物大分子分離的微球是多孔的，有多種粒徑和孔徑，可達1000?，根據(jù)需要接上了–OH, -COOH或–NH2等基團，以方便偶聯(lián)其他配體或配基。
利用上述微球，PAE開發(fā)了全系列蛋白純化凝膠，包括但不限于用于親和層析、離子交換層析、疏水層析、凝膠過濾等的層析填料。這些具有3H特性的產(chǎn)品不但可以用于實驗室研究，而且在工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)中也有廣泛的用途。
理化特性Physical and Chemical FEATURES
l 高化學穩(wěn)定性，高pH穩(wěn)定性
l 高機械穩(wěn)定性
l 粒徑分布單一，變幅極低
l 優(yōu)化的多孔結(jié)構(gòu)
l 的比表面積，載量高于傳統(tǒng)的多糖介質(zhì)
高流速
mSphere具有很高的機械穩(wěn)定性且粒徑單一，因此層析特性。由于其的機械穩(wěn)定性和單一的粒徑，mSphere具有的抗壓縮性能，不易出現(xiàn)堵塞。另外，它可耐操作過程中高至10MPa的壓力。因此，mSphere支持高達2000cm/hour的流速。
高載量
mSphere是一種可控制孔徑和粒徑的單分布多孔微球體，其比表面積高達> 500 m2/g，用其制備的層析填料具有很高的功能集團密度，其動態(tài)載量（dynamic binding capacity, DBC）。上圖是NTA-mSphere和NTA-Sepherose FF對15個His-標簽蛋白的載量分布。圖中藍色柱代表NTA-mSphere對某樣品的載量占NTA-Sepherose FF載量的倍數(shù)，紅線是NTA-Sepherose FF的相對載量。可見NTA-mSphere顯著超過NTA-Sepherose FF。
高分辨率
mSphere的粒徑相對較小（50mm）且分布相當均一（變幅低于5%），而且機械強度高，不易變形，因此分辨率明顯高于糖基微球。右圖是Ni-mSphere和NTA- Sepherose FF上樣量等條件均一條件下的洗脫峰。顯然，Ni-mSphere的峰形更“sharp"。
其他特點
除上述3H外，mSphere在pH1到14都是穩(wěn)定的，因此可以用0.5 MNaOH甚至更高的堿濃度進行在位清洗(CIP)。堿液在位清洗是科研產(chǎn)品除熱源以及雜蛋白的方法。
適用性強
mSphere的優(yōu)良特性極為適于制造生物物質(zhì)的分離和純化，PAE已經(jīng)用mSphere開發(fā)了多系列層析填料，包括但不限于以下類型：
l 親和層析填料（AffinitymSphereMedia）
l 離子交換填料（Ion ExchangemSphereMedia）
l 疏水層析填料（HydrophobicmSphereMedia）
l 反向?qū)游鎏盍希?/span>Polymer Reversed Phase ChromatographymSphereMedia）
l 分子篩（排阻）層析填料（gel filtrationmSphere Media）
l 功能化磁珠（MeganeticmSphere）
Appendix：
下表是mSphere與Agarose微球與蛋白純化有關(guān)的理化性質(zhì)的比較。從中可以看出，mSphere具有多方面的優(yōu)勢。
主要基材類型總結(jié)與對比
類型 | 基材 | 粒徑(μm） | pH穩(wěn)定性 | 壓力 | 流速(cm/h) |
Source 15 | PS/DVB | 15 | 1~14 | 10MPa | 900 |
Source 30 | PS/DVB | 30 | 1~14 | 10 | 2000 |
Resource | PS/DVB | 15 | 1~14 | 10 | 1800 |
MonoBeads | Monodisperse porous PS/DVB | 10 | 1~14 | 10 | 1200 |
MiniBeads | Monodisperse PS/DVB | 3, non porous | 1~14 | 10 |
|
Fast Flow | 6% cross-linked agarose | 45-165, avr. 90 | 2~13 | 0.3 | 300 |
Capto | Highly cross-linked agarose with dextran surface extender | 90 (d50V) | 2~13 | 0.3 | 1200 |
HP | 6% cross-linked agarose | 24-44, avr. 34 | 1~14 | 0.3 | 150 |
mSphere | Polyacrylate or PS/DVB | 3, 10, 15, 30, 50, 100 | 1~14 | 10 | 1200~2000 |
mSphereTM-為基材的層析填料分類介紹
Introduction to PAE’smSphereTM-Based Chromatography Matrix
PAE提供的層析填料都是以具備3H特征的單分散高交聯(lián)度聚丙烯酸酯微球mSphere為基材并在其表面加特殊涂層并接枝功能基團或配體制備的。與傳統(tǒng)層析填料相比，具有諸多更適于線性放大，加快工藝開發(fā)速度。不但適于實驗室研究用樣品的制備，而且是工業(yè)規(guī)模純化蛋白、多肽、核酸、抗生素和低分子量藥物不可回避的選擇。
基材：mSphere
粒徑/孔徑：默認50mm，粒徑800 ?。可按客戶要求提供粒徑15mm，30mm，100mm和孔徑300、500和800的產(chǎn)品。
詳情請訪問本公司網(wǎng)站：
親和層析填料 Affinity Chromatography Media
金屬螯合親和層析填料
PAE提供Ni-NTA-mSphere、Ni-IDA-mSphere和IMAC-mSphere三種金屬離子親和填料，分別適用于帶His標簽蛋白的純化和金屬蛋白的純化。
PAE的創(chuàng)新技術(shù)制備的金屬離子親和填料動態(tài)載量比Ni-NTA-瓊脂糖FF填料的載量高1倍。詳細情況見“mSphereTM微球簡介"部分。
關(guān)于NTA和IDA填料的討論，請參閱本公司網(wǎng)站的“NTA vs. IDA- a tale of two ligands" for details.
蛋白配基層析填料
Protein AG-mSphere：
Protein AG-mSphere是一種共價偶聯(lián)了基因工程改造過的重組Protein AG融合蛋白的填料，其配基帶有四個來自Protein A的Fc-binding結(jié)構(gòu)域和兩個來自Protein G的Fc-binding結(jié)構(gòu)域，分子量為50.4 kDa。該配基的結(jié)合能力對pH的依賴性比Protein A低，也具有不同于Protein A and G的性。Protein AG可以與人IgG的所有亞類結(jié)合，這對于純化多克隆抗體或未知亞類的單克隆抗體有其支出。Protein AG可以與IgA、IgE、IgM和IgD結(jié)合。Protein AG與小鼠除IgA、IgM或serum albumin以外的所有IgG亞類結(jié)合，因此可以用于純化和檢測小鼠的IgG抗體而又不受IgA、IgM和血清白蛋白的影響。小鼠的單抗往往對這種嵌合的Protein AG有比Protein A或Protein G更強的結(jié)合能力。Protein AG也曾被用來純化獼猴的IgG。
MabSure-mSphere：
產(chǎn)品編號為P008。其配基是Protein A的一種基因工程改造過的耐堿突變體，適于高堿在位清洗（CIP）。多點偶聯(lián)使其具有低脫落特性，更適合治療性抗體對安全性的要求。
與其他Protein A填料一樣，MabSure-mSphere可用于抗體的親和層析純化，也可以用于研究protein A的免疫吸附。
結(jié)合能力：對人IgG、IgG1、IgG2、IgG4高，對IgG3很低。對小鼠IgG1低，IgG2a、IgG2b、IgG3高。對兔IgG高。對大鼠IgG1低，IgG2和IgG2b很低，IgG2c中高。詳細情況請參考產(chǎn)品說明書。
Protein G'-mSphere,產(chǎn)品編號：P009。其配基是截短的Protein G的耐堿突變體，多點偶聯(lián)保證其低脫落，適于高堿在位清洗。可用于抗體的純化。該配基保留了對IgG的結(jié)合能力，但丟掉了對血清白蛋白和Fab結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。
P010, Protein L-mSphere，耐堿。其配體是基因工程改造過的Protein L，具有耐堿性，可在位清洗。Protein L是Peptostreptococcus magnus的表面蛋白，它可以與免疫球蛋白的L鏈結(jié)合，故名之。天然的Protein L由719 amino acid殘基組成，PI為4.0，分子量為95kDa。Protein A和ProteinG與免疫球蛋白的Fc結(jié)合，但Protein L與輕鏈即L鏈結(jié)合，重鏈的任何部位都與這種結(jié)合無關(guān)。因此，與Protein A和G相比，Protein L可以與更多類型的抗體結(jié)合。例如：IgG, IgM, IgA, IgE和IgD。Fab和scFv也可以與Protein L.結(jié)合。
P011：Streptavidin-mSphere，50% slurry。Streptavidin-mSphere是一種用來親和純化和定性含有的蛋白或DNA結(jié)合蛋白的層析填料。
氨基酸及多肽配基親和層析填料
P012，Arginine-?Sphere，50% slurry。
P013，GlutaThionine-?Sphere，50% slurry。
用于對GST（Glutathione S-Transferase）標簽蛋白親和純化的填料，配基為轉(zhuǎn)移酶。該填料具有選擇性，一步即可獲得純度超過95%的融合蛋白，且具有快速、溫和、非變性純化等優(yōu)點。
該填料亦可用于純化帶有可與結(jié)合序列的蛋白，例如Glutathione S-Transferase (GST)和glutathione peroxidase和glyoxalase I.
P014-5ml Lysine-?Sphere，50% slurry
其他配基親和層析填料
Con A-mSphere：
Gelatine-mSphere：
hIgG-mSphere：用于純化Protein A.
產(chǎn)品編號：P015，Benzamidine-mSphere，50% slurry
離子交換層析填料 Ion Exchange Media
功能基團：CM、S、SP、DEAE和Q
疏水層析填料 Hydrophobic Media
功能基團：Butyl、Phenyl和Octyl
復(fù)合模式層析填料 Multimodal Chromatography Media
功能基團：Adhere，MMC
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