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碧云天生產的BeyoAOF™無血清細胞凍存液(BeyoAOF™ Serum-free Cell Freezing Medium)，也稱BeyoAOF™無血清細胞冷凍存液(BeyoAOF™ Serum-free Cell Cryopreservation Medium)，是一種不含血清、無蛋白、無須程序降溫并能長期-80℃保存細胞的即用型細胞凍存液，適用于絕大部分的哺乳動物細胞凍存。本無血清細胞凍存液不含常用的胎牛血清(FBS)、不含任何動物來源(animal origin-free, AOF)的蛋白質，能減少細胞污染風險，確保細胞安全；而且使用本無血清細胞凍存液，可直接置于-80℃長期保存，無須程序性降溫，使用非常便捷。

細胞凍存液，也稱細胞培養凍存培養基或細胞凍存培養液等，英文名為Cell Culture Freezing Medium、Cell Freezing Solution或Cell Cryopreservation Medium等。

細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃的液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性長期保存起來，在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。同時適度地凍存一定量的細胞，可以防止因細胞被污染或其它意外事件而使細胞無法繼續培養，可以起到細胞保種的作用。

本產品為即用型溶液，使用方便。本產品是即用型的無菌溶液，待凍存的細胞收集細胞沉淀后，加入適量凍存液混勻即可，無需自行配制任何溶液，使用方便。

本產品無須程序降溫，可直接-80℃冷凍。細胞凍存和復蘇一般采用“慢凍快融"的方法，在細胞冷凍過程中通常需要使用BeyoCool™細胞凍存盒(FCFC012)等程序性降溫盒或采取程序性降溫步驟。而使用本無血清細胞凍存液，無須程序性降溫，可直接置于-80℃冷凍。

本產品能長期-80℃保存細胞，無須使用液氮。使用本無血清細胞凍存液，可直接置于-80℃長期保存。也可以在-80℃放置至少24小時后轉移至液氮中保存，無須程序性降溫步驟或使用程序降溫盒，使用非常便捷。

本產品化學成分明確，不含血清，使用安全。本產品使用限定化學成分的配方，含氨基酸、維生素、無機鹽、葡萄糖、DMSO等各種細胞所必須的營養成分和冷凍保護劑，含酚紅，不含常用的胎牛血清、不含任何動物來源的蛋白質，減少因血清批次帶來的凍存效果差異，也能降低各種病毒、霉菌和支原體等微生物對細胞的污染風險，確保細胞安全，同時也減少外源蛋白對細胞正常生長和分化的影響。

本產品凍存的細胞復蘇存活率高。本產品配方經過優化，使用本產品凍存的細胞復蘇后的存活率高，并能保持良好的細胞活性。經過測試，對于凍存復蘇存活率較高的HeLa (人宮頸癌細胞) (C6330)、BEAS-2B (人正常肺上皮細胞) (C6106)等細胞，-80℃凍存一年后，復蘇存活率高于90%，對于凍存復蘇存活率較低的Jurkat (人T淋巴細胞瘤細胞) (C6456)、L929 (小鼠成纖維細胞)等細胞，-80℃凍存一年后，復蘇存活率高于65%，與使用含FBS的凍存液效果基本一致，與同類型無血清細胞凍存液相比，效果基本一致或更好。本產品凍存的某些細胞，甚至置于-20℃凍存6個月，復蘇存活率高于50%。本產品(BeyoAOF™ Freezing Medium) (C0210B)與含FBS的凍存液(Normal Freezing Medium)、國外同類產品Competitor G在-80℃凍存一年的復蘇存活率比較參見圖1。

圖1.BeyoAOF™無血清細胞凍存液的復蘇存活率效果圖。使用本產品(BeyoAOF™ Freezing Medium)與含FBS的細胞凍存液(C0210) (Normal Freezing Medium)、國外同類產品Competitor G三種不同的細胞凍存液，將HeLa、BEAS-2B、Jurkat、L929四種細胞直接置于-80℃凍存一年后，檢測復蘇存活率。實際結果會因實驗條件、細胞狀態等的不同而存在差異，圖中數據僅供參考。

如果每管細胞使用1ml細胞凍存液，50ml和200ml的本產品可分別用于約50管和200管細胞的凍存。

-20℃保存，一年有效。4℃保存，3個月有效。

對于某些特殊細胞或特別珍貴的細胞，建議同時使用常規的含FBS的凍存液進行對比測試，確認復蘇存活率后再使用本產品。

本產品含DMSO，對DMSO敏感的細胞，建議進行凍存的預實驗。

對于不太珍貴的常見細胞，推薦使用本無血清細胞凍存液可直接置于-80℃長期保存，這樣使用和操作更加便捷。但對于比較珍貴的細胞或者復蘇效率比較低的細胞，如果希望獲得更好的凍存和復蘇效果，建議使用BeyoCool™細胞凍存盒(FCFC012)等進行程序性降溫凍存，并在-80℃放置至少24小時后轉移至液氮中保存。

使用前需確保細胞凍存液融化，并輕輕混勻。融化后的細胞凍存液置于4℃保存，三個月內有效。

請確保凍存前細胞生長情況良好，凍存時活細胞比例通常宜大于90%。

加入細胞凍存液并混勻后須盡快移入-80℃超低溫冰箱內保存。-80℃超低溫冰箱內保存時，請將凍存細胞置于-80℃超低溫冰箱內部，避免頻繁打開冰箱門導致門邊的溫度發生變化而使凍存效果變差。

請使用耐受有機溶劑的marker筆(Alcohol Resistant Marker)進行標記，以防做的標記被酒精或異丙醇等有機溶劑擦掉，而不能辨識。

本產品于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：
1.細胞凍存
a.融解并混勻細胞凍存液，4℃保存備用。
b.對于貼壁細胞：去除培養液后用無菌PBS輕輕洗滌細胞一次以除去殘留的血清，然后用適量的細胞消化液如碧云天的細胞消化液(C0203、C0208)消化細胞。可以用移液器輕輕吹打細胞，如果發現細胞剛剛開始可以被吹打下來(通常顯微鏡觀察細胞變圓或肉眼觀察細胞間出現縫隙時細胞即可被吹打下來)，就可以迅速吸除，并立即加入適量含血清的細胞培養液以終止的作用，隨后把細胞輕輕吹打下來，并適當吹散和重懸。注意千萬不要過度消化細胞，以消化至剛好能把細胞吹打下來為。消化過度的細胞由于后續生長狀況會比較差，通常不宜再用于冷凍保存。吹打和重懸細胞過程需要適當輕柔，否則可能會影響復蘇時的細胞存活率。
對于懸浮細胞：直接從步驟c開始。
c.將細胞懸液轉移至適當離心管中，如15ml無菌離心管。
d.細胞計數，計算出細胞總數和所需細胞凍存液的量。細胞的凍存密度一般為1×106-1×107 cells/ml。
e.100-200×g，離心5-10分鐘，棄上清。離心速度和時間取決于細胞類型。
f.加入適量細胞凍存液，用移液槍輕輕吹打以重懸細胞，根據細胞類型調整細胞密度(一般為1×106 cells/ml或更高)。
g.分裝于1.5ml或2ml細胞凍存管中，并做好標識。注意：如果后續擬放入液氮罐中保存，須使用專門用于液氮凍存的細胞凍存管，不能使用普通的離心管。否則在后續解凍時，易發生離心管爆裂，而容易造成人身傷害。
h.將細胞凍存管放置在-80℃冰箱內。如果后續擬放在液氮中長期保存，可在-80℃冰箱內保存24小時后移入液氮罐內。注：如果希望獲得更好的凍存效果，推薦使用BeyoCool™細胞凍存盒(FCFC012)等進行程序性降溫凍存，并在-80℃放置至少24小時后轉移至液氮中保存。
2.細胞復蘇
a.從-80℃冰箱或液氮中取出凍存管，迅速置于37℃水浴鍋內，輕輕晃動(1分鐘內)，直至只剩小部分冰塊殘留。
b.將細胞懸液轉移至15ml無菌離心管中，加入約5-10ml預熱的培養基，輕輕混勻；對于一些復蘇效率很高的細胞也可直接將細胞懸液轉移至離心管進行下一步驟的離心。
c.100-200×g，離心5-10分鐘，離心速度和時間取決于細胞類型。
d.確保細胞沉積于管底后，小心棄掉上清。
e.加入適量預熱的培養基，輕輕吹勻后轉移至培養器皿中，放入細胞培養箱中培養。
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