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一種枯草芽孢桿菌生產(chǎn)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的方法，屬于食品生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明對(duì)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶產(chǎn)生菌枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)SK11.004進(jìn)行斜面、種子、發(fā)酵三級(jí)培養(yǎng)；從發(fā)酵液中分離純化得到γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶酶粉。本發(fā)明提供的利用枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)SK 11.004生產(chǎn)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的方法，其育種工作量小，費(fèi)用低，*性能可靠，可以進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)，成本低，可用于大規(guī)模生產(chǎn)，本發(fā)明使用的枯草芽孢桿菌所產(chǎn)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶酶活可達(dá)4U/mL以上。其發(fā)酵產(chǎn)品無毒，可以直接用于生產(chǎn)許多有價(jià)值的γ-谷氨酰類化合物，如L-γ-谷氨酰-L-多巴、γ-谷氨酰牛磺酸、γ-谷氨酰、、茶氨酸等。
1、一種枯草芽孢桿菌生產(chǎn)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的方法，其特征在于：(1)對(duì)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶產(chǎn)生菌枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)SK11.004進(jìn)行斜面、種子、發(fā)酵三級(jí)培養(yǎng)；斜面培養(yǎng)：培養(yǎng)基組分以g/L計(jì)：蛋白胨8～10，牛肉膏3～5，*鈉3～5，瓊脂20，

pH 7.0～7.2，121℃*20min，培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度35～40℃，培養(yǎng)時(shí)間8～16小時(shí)；種子培養(yǎng)：培養(yǎng)基組分以g/L計(jì)：葡萄糖15～20，酵母膏10～15，玉米漿8～12，MgSO4·7H2O 0.3～0.5，K2HPO4 0.5～2，含消泡劑聚氧*氧*甘三油0.5mL/L，pH 7.0～7.2，121℃*20min；培養(yǎng)條件為：250mL三角瓶裝液30mL，搖瓶轉(zhuǎn)速200rpm，培養(yǎng)溫度37℃，培養(yǎng)時(shí)間8～12小時(shí)；一級(jí)種子培養(yǎng)基按體積百分2.5％接入裝液量為18升液體種子培養(yǎng)基的30升二級(jí)種子罐中，培養(yǎng)條件為：攪拌速度200rpm，控制通風(fēng)量：0～5小時(shí)為8～10L/min，5～12小時(shí)為12～15L/min；控制培養(yǎng)溫度為35～40℃，培養(yǎng)時(shí)間8～12小時(shí)；發(fā)酵培養(yǎng)：培養(yǎng)基組分以g/L計(jì)：蔗糖15～35，胰蛋白胨5～8，玉米漿12～15，MgSO4·7H2O 0.3～0.5，K2HPO4 0.5～2，消泡劑聚氧*氧*甘三油2mL/L，pH 7.0～7.2，121℃*20 min，調(diào)pH 7.0～7.2；

種子培養(yǎng)基按體積百分2.5％接入裝液量700升液體發(fā)酵培養(yǎng)基的1噸發(fā)酵罐中，培養(yǎng)條件為：攪拌速度200rpm，控制通風(fēng)量：0～8小時(shí)為10～12L/min，8～16小時(shí)為14～16L/min；控制培養(yǎng)溫度為35～40℃，培養(yǎng)時(shí)間14～16小時(shí)；(2)從發(fā)酵液中分離純化得到γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶酶粉；將制得的發(fā)酵液經(jīng)離心或板框過濾去菌體，制得發(fā)酵液上清液，經(jīng)超濾除去鹽和雜蛋白，再經(jīng)20％酒精沉淀，離心得沉淀，*后將沉淀進(jìn)行冷凍干燥，即得γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶酶粉。