
本發明公開了一種水華藍藻制備藻藍蛋白的方法,以鮮藻為原料,首先提取粗濾液,鮮藻脫水后,加入緩沖液,混勻,然后冰凍,凍結后,取出置室溫下融溶,凍融3-5次,用板框過濾;其次是超濾純化,用截留分子量為1000-20萬道爾頓的中空纖維超濾器,經過微濾的粗提液使分子量較小的各種物質,透過超濾膜而被 第三是靜置-澄清純化,經過超濾純化的藻藍蛋白的部分,除去大部分小分子,同時進行濃縮,經濃縮的藻藍蛋白部分在一定溫度保藏;第四是*磷灰石柱層析純化。本發明方法簡便,純化和濃縮效率高,具有社會、環境和經濟效益。
1、一種水華藍藻制備藻藍蛋白的方法,包括下列步驟:A、從富營養化水體中收獲水華藍藻,經濃縮、脫水分后得到鮮藍藻藻糊;B、提取藍藻蛋白粗提液:取藍藻鮮藻,經脫水后,按鮮藻與*緩沖液重量體積比1∶1-1∶10的比例加入0.05M-0.2M的*緩沖液,pH5.0-9.0,混勻,然后置-10至-20℃,冰凍,待凍結之后,取出置室溫20-25℃下使之融溶,凍融處理3-5次,然后利用板框過濾或離心分離法,使粗提液與細胞碎片相分離而得到藍藻蛋白粗提液;C、微濾、預處理:上步驟的藍藻蛋白的粗提液,
依次通過孔徑為2-3μm和0.45-0.22μm的二種微濾器,進行微濾處理,控制壓力在0.02-0.1Mpa以下;D、超濾純化工序:選用截留分子量為1000-20萬道爾頓的中空纖維超濾器與蠕動泵配套使用,處理經過微濾處理的粗提液,控制超濾的流量為1-5升/分鐘,通過超濾,小分子量的雜蛋白,小分子的有機物,多肽,及其它無機小分子,包括分子量1千的藍藻*,均透過超濾膜而被*,而藻藍蛋白及其它大分子則滯留在超濾膜內,藻藍蛋白的純度得以提高;E、靜置—澄清純化工序:經過超濾純化的藻藍蛋白部分,除去了分子量,濃縮,將濃縮后的藻藍蛋白部分在3-5℃保藏2-3天后,經過1000-5000g離心或過濾處理;F 磷灰石柱層析純化工序:將通過靜置—澄清純化工藝處理的材料上*磷灰石柱,使柱的1/3著染,然后用0.001M-1M不同濃度的*緩沖液分步洗脫,按*緩沖液濃度高低依次選用濃度梯度,*緩沖液使用劑量為1-3個柱體積,通過洗脫,在0.125-1M濃度的*緩沖液洗脫時,灰藍色蛋白的別藻藍蛋白才洗脫下來。























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