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一種重組酵母脂肪酶的發(fā)酵制備方法，屬于酶的基因工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明將含有華根霉(Rhizopus chinensis)CCTCC M201021脂肪酶編碼基因SEQ IDNO：1的重組酵母菌株GS115/pPIC9K-proRCL種子培養(yǎng)，然后按5％～10％接種量接種于含40g/L甘油和4mL/L微量元素PTM1溶液的基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基BSM中；通氣攪拌培養(yǎng)，流加補(bǔ)料生長(zhǎng)培養(yǎng)液，流加誘導(dǎo)培養(yǎng)液，收集發(fā)酵液，加入終濃度均為3％～6％的*鈣和*氫二鈉作為酵母菌體絮凝劑，板框過(guò)濾，超濾濃縮，*終制備得到濃縮5～10倍的液體脂肪酶制品；重組酵母發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程中脂肪酶的表達(dá)量可達(dá)到2000U/mL發(fā)酵液，蛋白表達(dá)量為2.5g/L，發(fā)酵液比活800U/mg。
1、一種發(fā)酵制備脂肪酶的方法，其特征是步驟為：將含有華根霉(Rhizopus chinensis)CCTCC M201021脂肪酶編碼基因SEQ IDNO：1的重組酵母菌株GS115/pPIC9K-proRCL種子培養(yǎng)，然后按5％～10％接種量接種于含40g/L甘油和4mL/L微量元素PTM1溶液的基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基BSM中；通氣攪拌培養(yǎng)，在整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程中

氧飽和度控制在20％～60％；流加補(bǔ)料生長(zhǎng)培養(yǎng)液：菌種經(jīng)過(guò)一段適應(yīng)期后進(jìn)入指數(shù)生長(zhǎng)期，此時(shí)pH受到閉環(huán)控制，自動(dòng)流加質(zhì)量濃度25％的工業(yè)*控制pH5～7，當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)基中的底物甘油耗盡后，此時(shí)DO陡然上升，開(kāi)始流加含12mL/L的PTM1的500g/L的甘油補(bǔ)料生長(zhǎng)培養(yǎng)液；溫度控制在28℃；流加誘導(dǎo)培養(yǎng)液：當(dāng)細(xì)胞光密度OD600達(dá)到60～120后，流加補(bǔ)料生長(zhǎng)培養(yǎng)液，維持饑餓狀態(tài)約30min，*耗盡甘油，然后補(bǔ)入*誘導(dǎo)培養(yǎng)液，體系中*濃度控制在質(zhì)量百分0.05％～3％，繼續(xù)培養(yǎng)2～5天，溫度控制在20～28℃；收集發(fā)酵液，加入終濃度均為3％～6％的*鈣和*氫二鈉作為酵母菌體絮凝劑，板框過(guò)濾，超濾濃縮，制備得到濃縮5～10倍的液體脂肪酶制品；所述培養(yǎng)基為：(1)種子培養(yǎng)基BMGY培養(yǎng)基：蛋白胨20g/L，酵母提取物10g/L，YNB 13.4g/L，甘油20g/L，

500×2mL/L，pH6.0*緩沖液100mL/L；用500mL的三角瓶培養(yǎng)，裝液量10％；(2)微量元素PTM1溶液：CuS04·5H206g/L，KI0.08g/L，MnSO4·H2O3g/L，Na2MoO4·2H200.2g/L，H3BO30.02g/L，ZnSO4·7H2O20g/L，F(xiàn)eSO4·7H2065g/L，CoCl2·6H200.5g/L，0.2g/L，H2SO45mL/L；(3)基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基BSM：85％H3PO426.7mL/L，CaSO40.93g/L，K2SO418.2g/L，MgSO4·7H2014.9g/L，KOH4.13g/L；(4)發(fā)酵培養(yǎng)基：用基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基BSM配制成含40g/L甘油和4mL/L微量元素PTM1溶液；(5)補(bǔ)料生長(zhǎng)培養(yǎng)液含12mL/L的PTM1的500g/L甘油補(bǔ)料液；(6)誘導(dǎo)培養(yǎng)液含12mL/L的PTM1的100％*誘導(dǎo)液。