細胞名稱

人尤文氏肉瘤 ; RD-ES

細胞品牌

通蔚生物

細胞規(guī)格

1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細胞英文

RDES ; RDES-1

基本形態(tài)

上皮細胞樣

傳代方法

1 : 2傳代

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2,5% ；溫度：37℃

生長特性

混合生長

消化時間

1-2分鐘

凍存條件

無血清細胞凍存液

培養(yǎng)基

RPMI1640+10%FBS   RD-ES培養(yǎng)基  

培養(yǎng)環(huán)境

37℃，5%CO2，95%AIR

供應范圍

僅供科研使用

特征特性

RD-ES 是一種上皮細胞系，分離自患有尤文氏肉瘤的 19 歲男性 White 的肱骨。細胞系 RD-ES 可用于癌癥研究。

注意事項

懸浮細胞離心收集 , 貼壁細胞消化處理

到貨處理

1、收到細胞后，檢查外包裝情況和箱內是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已揮發(fā)等問題，請即時聯(lián)系。

2、將細胞取出轉移至液氮或－80 度冰箱保存，建議盡早復蘇。

3、復蘇一管如有活性狀態(tài)問題及時與我們聯(lián)系，會有技術人員與您溝通指導后再復蘇二管。
特別說明：未與我方聯(lián)系擅自復蘇二管出現(xiàn)問題不予售后。

細胞復蘇

1、從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁。

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。

3、棄上清，沉淀用 5ml 培養(yǎng)基重懸，接種 T25 培養(yǎng)瓶，于 37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4、隔天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

細胞傳代

1、方法一：收集細胞懸液，至離心管中 1000rpm 離心 5min，棄上清，加 1-2mL 培養(yǎng)基重懸，按 1：2 的比例進行分瓶傳代，補充新的培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，放入 37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。   
2、方法二：可選用半換液方式，將 T25 瓶子豎起來，輕輕拍打兩下，在培養(yǎng)箱靜置 10 分鐘， 肉眼可見大部分細胞沉在底部，輕輕吸去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按 1： 2 比例分瓶，補充新的培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，放入 37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

細胞凍存

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次。

2、添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。

3、棄上清，沉淀細胞加入 1ml/支的無血清凍存液，混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液）

4、將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉入液氮罐中，需在-80℃冰箱存放 24 小時以上。

T25細胞到貨處理

觀察

1、收到細胞后，請及時核對培養(yǎng)瓶上標注的細胞名稱是否與訂購的細胞名稱一致以及培養(yǎng)瓶是否有破損或漏液等異常情況。

處理

1、75%酒精棉球擦拭 T25 細胞培養(yǎng)瓶外部。
2、顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（40x,100x,200x 各一張）前三天照片為重要售后依據，不提供照片默認收到狀態(tài)良好。

3、不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞放入 37 度培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時后再做處理，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

4、收到細胞后，及時查看說明書是貼壁細胞還是懸浮細胞形態(tài)，并按常規(guī)貼壁或懸浮細胞的傳代方法操作。

半貼壁、半懸浮細胞處理方法

1、該細胞是半貼壁半懸浮生長，懸浮細胞用離心管收集細胞懸液，1000rpm 離心 5min，收集上清（后期對比培養(yǎng)使用）。

2、當未超過 80%匯合度時，將離心收集到的懸浮細胞沉淀加入 5ml 培養(yǎng)基重懸，加入原培養(yǎng)瓶中，放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng)。

3、超過 80%匯合度時，將貼壁細胞根據貼壁細胞傳代方法消化、離心、收集；將懸浮細胞和貼壁細胞的沉淀用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸收集到一起，混勻后，按 1:2 進行分瓶傳代（2個 T25）。（傳代時建議一瓶用原瓶里面的培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基，進行對比培養(yǎng)。）
（注意：如收到密封培養(yǎng)瓶，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)時要將培養(yǎng)瓶蓋子擰松)

細胞予重發(fā)

1. 細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)。

2. 收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。

3. 收到細胞3天內，發(fā)現(xiàn)污染問題，經核實后，重發(fā)。

4. 常溫發(fā)貨細胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨細胞復蘇2天后，絕大多數(shù)細胞未存活，經核實后，重發(fā)。

5. 常溫發(fā)貨的細胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇2天后，出現(xiàn)污染經核實后，重發(fā)。

6. 細胞活性問題在收到產品3天內提出真實實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后，重發(fā)。

細胞不予重發(fā)

1. 客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)。

2. 客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

3. 非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

4. 細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。

5. 細胞培養(yǎng)時經其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。

6. 收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。