紫外可見分光光度計(jì)波長(zhǎng)準(zhǔn)確度和應(yīng)用范圍
波長(zhǎng)重復(fù)性是指波長(zhǎng)的實(shí)際測(cè)定值與理論值的差，是分光光度計(jì)的重要技術(shù)指標(biāo)，特別是在對(duì)多臺(tái)儀器的測(cè)試結(jié)果進(jìn)行比較時(shí)波長(zhǎng)顯得格外重要，如果儀器的波長(zhǎng)準(zhǔn)確度不好，就無法進(jìn)行比較或比較不出正確的結(jié)果。因?yàn)閷?duì)同一物質(zhì)，在不同波長(zhǎng)測(cè)試時(shí)，由于不同波長(zhǎng)時(shí)摩爾吸光系數(shù)不同，就會(huì)有不同的靈敏度，即使是同一樣品，測(cè)試的數(shù)據(jù)也不會(huì)相同。目前國(guó)內(nèi)很多廠家，都采用氧化鈥玻璃或鈥溶液對(duì)儀器的多個(gè)波長(zhǎng)點(diǎn)（有：241nm、279.4nm、333.7nm、360.9nm、418.7nm、536.2）等十一個(gè)點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。但是檢測(cè)某臺(tái)儀器的波長(zhǎng)準(zhǔn)確度是有很多種方法的，在此不作詳細(xì)介紹。
引起波長(zhǎng)的不準(zhǔn)確，主要有：儀器的本身變形，給光柵的傳動(dòng)結(jié)構(gòu)帶來了影響，從而影響波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度；光柵傳動(dòng)結(jié)構(gòu)的精度，這對(duì)波長(zhǎng)準(zhǔn)確度具有決定性的作用，國(guó)內(nèi)目前多數(shù)采用絲桿、扇形齒輪以及電機(jī)直接帶動(dòng)等，這其中絲桿結(jié)構(gòu)基本上能讓波長(zhǎng)準(zhǔn)確度做到±0.5nm，電機(jī)直接帶動(dòng)結(jié)構(gòu)一般能夠做到±1.5nm，扇形齒輪結(jié)構(gòu)一般能夠做到±2nm，所以絲桿結(jié)構(gòu)相對(duì)較好，目前也有很少一部分廠商采用扇形齒輪加絲桿來進(jìn)行傳動(dòng)，當(dāng)然這種結(jié)構(gòu)的波長(zhǎng)準(zhǔn)確度會(huì)更高一些。當(dāng)然也有一些其它因素能直接影響到儀器的波長(zhǎng)準(zhǔn)確度，例如長(zhǎng)年不重新鑒定、電機(jī)用的不好等等都會(huì)影響到波長(zhǎng)準(zhǔn)確度。
（1）定量分析
根據(jù)瑯伯-比爾定律，樣品的濃度和吸光度是成正比關(guān)系的，濃度越大，吸收值越高，所以分光光度計(jì)用的*多的還是定量分析，定量分析的種類有很多，這里介紹常用的幾種定量分析方法：
A、**法：**法是紫外可見分光光度計(jì)諸多分析方法中使用*多的一種方法。這是一種以瑯伯-比爾定律A=εbC為基礎(chǔ)的分析方法，某一物質(zhì)在一定波長(zhǎng)下ε值是一個(gè)常數(shù)，石英比色皿的光程是已知的，也是一個(gè)常數(shù)。因此，可用紫外可見分光光度計(jì)在λmax波長(zhǎng)處，測(cè)定樣品溶液的吸光度值A(chǔ)。然后，根據(jù)瑯伯比爾定律求出C=A/εb，則可求出該樣品溶液的含量或濃度。
B、標(biāo)準(zhǔn)法：在選定的波長(zhǎng)處，在相同的測(cè)試條件下，分別測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液C標(biāo)和被測(cè)試樣品溶液C樣的吸光度A標(biāo)和A樣。然后，按下式求得樣品溶液的濃度或含量。
C樣=A樣/A標(biāo)×C標(biāo)
C、標(biāo)準(zhǔn)曲線法
紫外可見分光光度計(jì)*常用的定量分析方法是標(biāo)準(zhǔn)曲線法。即先用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制一定濃度的溶液，再將該溶液配制成一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液。在一定波長(zhǎng)下，測(cè)試每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，以吸光度值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)應(yīng)得濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。**，將樣品溶液按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制程序測(cè)得吸光度值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品溶液對(duì)應(yīng)的濃度或含量。
（2）定性分析
如果未知物的紫外吸收光譜的**吸收峰波長(zhǎng)λmax、*小吸收峰波長(zhǎng)λmin、**摩爾吸光系數(shù)εmax，以及吸收峰的數(shù)目、位置、拐點(diǎn)與標(biāo)準(zhǔn)光譜數(shù)據(jù)一致，就可以認(rèn)為是同一種化合物。定性分析的主要目的是知道分析樣品中是什么物質(zhì)。
定量分析和定性分析是分光光度計(jì)的兩大主要功能，特別是定量分析。其它的分析都應(yīng)該是從這兩大種功能中發(fā)展出來的。
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