摘要：生物總黃酮是指黃酮類化合物，是一大類天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分。在自然界中見的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃（醇）、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷及新黃酮類等。

目的建立中總黃酮的含量測(cè)定。方法色譜柱為KromasilC18；以甲醇水醋酸（45∶53∶2）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)359nm；外標(biāo)法定量。結(jié)果總黃酮在0.0528～0.3168μg/μl范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，Y=16714X-82.436，r=0.9994，平均回收率為96.19%，RSD=1.2%，（n=6）。結(jié)論所用方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確，可用于的質(zhì)量控制。

是由紫花地丁、蒲公英、、半邊蓮4味藥材組成的中藥復(fù)方制劑，具有清熱解毒、利濕、退黃的功能。用于熱癤癰毒、咽喉腫痛、風(fēng)熱火眼、濕熱黃疸等的治療。收載于《中國(guó)藥典》2005年版Ⅰ部［1］。測(cè)定采用HPLC法，以蘆丁為對(duì)照品，對(duì)中蒲公英的總黃酮進(jìn)行了含量測(cè)定。方法簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性較好。

1儀器與試藥1.1儀器日本高效液相色譜系統(tǒng)（日本HITACHI系列）；UV757紫外可見分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；KQ-100A型（昆山市超聲儀器有限公司）；XS205DU電子天平（梅特勒-托利多）。

1.2試藥蘆丁對(duì)照品（中國(guó)生物制品檢定所）；由修正藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司提供，20g/袋，（批號(hào)：051005，053006，054003）；空白對(duì)照藥材購(gòu)于東北大藥房錦州分店；甲醇：一級(jí)色譜純（天津市登峰化學(xué)試劑廠），水為雙蒸水，其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱為KromasilC18（5μm，4.6mm×250mm）；流動(dòng)相為甲醇水醋酸（45∶53∶2）；流速：0.8ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)359nm；進(jìn)樣10μl；柱溫30℃；室溫操作。精密稱取蘆丁對(duì)照品0.1mg，用甲醇稀釋，溫?zé)崛芙猓⒂眉状级ㄈ葜?0ml容量瓶中，搖勻，使用UV757紫外分光光度計(jì)在200～500nm范圍內(nèi)掃描，測(cè)得蘆丁在254nm，359nm處有兩個(gè)吸收峰，由于254nm雜質(zhì)峰較大，而359nm則較小，且易分離，故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為359nm。

2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取蘆丁對(duì)照品13.2mg，置25ml容量瓶中，加甲醇溫?zé)崛芙獠⑾♂屩量潭龋瑩u勻，備用。

2.3供試品溶液的制備取樣品，研細(xì)，精密稱定10.0g，置100ml具塞碘量瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min。放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。取續(xù)濾液作為供試品溶液。取去蒲公英藥材的樣品，同法制備空白對(duì)照液。取上述溶液5.0ml置25ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。按上述色譜條件繪制三溶液的色譜圖見圖1～3。

2.4線性關(guān)系考察精密量取對(duì)照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0ml，置10ml容量瓶中加甲醇定容至刻度，搖勻，用液相色譜儀測(cè)定，進(jìn)樣10μl，以進(jìn)樣量與峰面積計(jì)算得回歸方程：Y=16714X-82.436，r=0.9994，表明總黃酮在0.0528～0.3168μg范圍內(nèi)線性良好。

2.5精密度考察精密量取蘆丁對(duì)照品溶液（528μg·ml-1）10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，按上述色譜條件測(cè)定，各次峰面積積分值的RSD=0.85%。

2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批號(hào)樣品（051005）5份，分別進(jìn)行供試品溶液的制備，測(cè)定，同時(shí)取對(duì)照品溶液10μl進(jìn)樣測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算含量，RSD=1.15%。

2.7加樣回收率實(shí)驗(yàn)取已知含量的樣品（批號(hào)：051005）內(nèi)容物10g，精密稱定，精密加入10ml蘆丁對(duì)照品溶液（0.528mg·ml-1），按照供試品溶液制備項(xiàng)下的制備方法，依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。表1回收率測(cè)定結(jié)果（略）

2.8樣品的含量測(cè)定精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算，測(cè)定結(jié)果見表2［2］。表2樣品含量測(cè)定結(jié)果（略）

3討論蘆丁的甲醇溶液經(jīng)紫外分光光度計(jì)掃描，在254nm，359nm處有兩個(gè)吸收峰，由于254nm雜質(zhì)峰較大，而359nm處則較小，且易分離，故選359nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

色譜條件在流動(dòng)相的選擇過程中，選擇甲醇與水適量比例，反復(fù)實(shí)驗(yàn)，使雜質(zhì)峰與所測(cè)物質(zhì)峰充分分離，加入適量酸，達(dá)到分離效果，定量更準(zhǔn)確。