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細胞培養常見問題解答

2023年01月10日 11:49:21      來源:上海博源生科技有限公司 >> 進入該公司展臺      閱讀量:26

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      1為什么要在溶解的一周內使用貯存在4℃冰箱中的液體溶液?
 
  答:在4℃就可能開始降解,如果在室溫下放置超過30分鐘,就會變得不穩定。
 
  2怎樣查到一個特定細胞株的相關知識和培養條件?
 
  答:ATCC(AmericanTypeCultureCollection)收集了絕大多數細胞的詳細資料。打開ATCC網頁的Cellsandhybridomas鏈接,輸入細胞名稱就可以搜索ATCC的細胞數據庫。數據庫中有每一種細胞的詳細描述,包括細胞的來源,培養和凍存條件,以及相關文獻等資料。
 
  3支原體(mycoplasma)污染的細胞,是否能以肉眼觀察出異狀?
 
  答:不能。除極有經驗之專家外,大多數遭受支原體污染的細胞株,無法以其外觀分辨之。
 
  4細胞的滲透壓耐受性是多少?
 
  答:細胞必須生活在等滲環境中,大多數培養細胞對滲透壓有一定耐受性。人血漿滲透壓290mOsm/kg,可視為培養人體細胞的理想滲透壓。鼠細胞滲透壓在320mOsm/kg左右。對于大多數哺乳動物細胞,滲透壓在260-320mOsm/kg的范圍都適宜。
 
  5培養細胞出現死亡其可能的原因有什么?解決辦法有哪些?
 
  答:可能的原因有培養箱內無CO2;培養箱內溫度波動太大;細胞凍存或復蘇過程中損傷;培養液滲透壓不正確;培養液中有毒代謝產物堆積等。
 
  解決辦法可以檢測培養箱內CO2濃度,檢查培養箱內溫度;取新的保存細胞種;檢測培養液滲透壓等;換入新鮮培養液等。
 
  6如何消除組織培養的污染?
 
  答:當重要的培養細胞污染時,研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母,把污染細胞與其它細胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺,檢查HEPA過濾器。
 
  高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性,因而,做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養污染的實驗步驟。
 
  1)在無抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞,稀釋到常規細胞傳代的濃度。
 
  2)分散細胞懸液到多孔培養板中,或幾個小培養瓶中。在一個濃度梯度范圍內,把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0mg/ml。
 
  3)每天觀測細胞毒性指標,如脫落,出現空泡,匯合度下降和變圓。
 
  4)確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養液培養細胞2-3代。
 
  5)在無抗生素的培養基中培養細胞一代。
 
  6)重復步驟4。
 
  7)在無抗生素的培養基中培養4-6代,確定污染是否以已被消除。
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