細胞的生長過程是有一定的規律的，即潛伏期→指數增生期→停滯期。細胞接種后，細胞數量在潛伏期之后呈對數增長模式，在生長3-4天后，細胞數量達到飽和密度，如不及時進行傳代，細胞就會停止增殖，進入停滯期。因此，對細胞進行傳代是細胞培養實驗中*常規的操作。

1.
在從培養箱中取出細胞之前，需要對生物安全柜進行清潔并設置好參數，紫外殺菌30min，風機工作10min后方可使用。

2.
將所需要的所有實驗用具準備好，用70%酒精對雙手以及操作臺上的物品進行表面消毒。

3.
對于HEK293這類懸浮細胞的傳代，需先從細胞培養瓶中取出一個小樣本（500-1000ml）進行取樣，用細胞計數儀計數。可采用人工或儀器測定細胞數、細胞密度以及細胞活率。常使用臺盼藍、或自動細胞計數器。

以自動細胞計數器為例，在細胞計數時，使用臺盼藍指示活細胞與死細胞的比例。染色劑使死細胞變藍，但具有完整膜的健康細胞將不變色。計數細胞的總數和死（藍色）細胞的數量。

取樣過程中，仔細檢查培養的細胞是否存在污染或惡化的跡象，即細胞培養液很黃，或渾濁，或有明顯的霉菌團。

4.
根據實驗需要計算傳代所需的細胞用量，建議細胞以0.2-0.4×106
cells/ml的起始密度接種到在37℃水浴預熱30min以上的新鮮培養基中。

如果您使用的是復蘇的細胞，建議您至少培養兩代后再用于其他用途。

5.
加入所需的培養基，輕輕混合細胞，并將溶液移到新鮮的培養瓶中，可根據需要分成多個培養瓶。

需要注意的是傳代培養使用的M
293-TI培養基體積大致為容器體積的20%，即100
mL的培養瓶的用量是15-20
mL 或250
mL 的培養瓶的用量是50-60
mL，這對于保持*佳的氣體交換是十分重要的。

6.
吹氣操作（如果用的是可以通5%
CO2的培養搖床，不用充氣操作），用一根管子在生物安全柜中往培養瓶中吹氣30s，然后蓋上瓶蓋。

7.
放置于搖床培養，37℃，5%
CO2，轉速為110-175
rpm的恒溫搖床中進行培養。如果是50ml試管培養，需將搖床轉速調到250
rpm左右。

如果細胞培養瓶是帶通氣塞的瓶子，則直接放在5%
CO2的培養箱中培養，如果是不帶通氣塞的瓶子，則需要適當旋松瓶口，以利于氣體交換，保持培養系統中溶氧和二氧化碳需求，3-5天傳代一次。

具體的操作可以去搜索“HEK293細胞傳代培養”相關的視頻。