隨著計算機、光學顯微鏡、大數值孔徑復消色差物鏡、高分辨率分析顯示、激光源、激光功率、高敏感度探測器、聲光轉換電子控制和各種熒光標記物的發展,共聚焦顯微鏡向更精、更快、多維和無損傷性分析的方向發展。技術進步不斷使共聚焦顯微鏡產生革新,我們重點關注三大共聚焦顯微鏡制造商,其中包括奧林巴斯顯微鏡。
在生命科學研發中所占的比重共聚焦顯微技術幾乎已經成為生物醫學中一個標準的研究工具。 借助其他各種常規分析,通過成像方法回答了越來越多的科學問題。現在的共聚焦顯微鏡的功能非常多,好像是一個科研工作站,其應用也大多在生命科學研究領域。尼康95%的共聚焦顯微鏡系統都銷往生物科學領域。而奧林巴斯顯微鏡在北美的銷售,成像相關設備和軟件的市場都集中在生命科學領域,幾乎所有的共聚焦顯微鏡都供應到生命科學的實驗室和研究中心。應用于活細胞的共聚焦顯微鏡對活細胞研究是必要的,并且正在成為活細胞研究的一個常規工具。如果一個多熒光蛋白質標記的細胞有很小的時間間隔的激發光譜,那么要觀測它們,就需要利用光譜成像來區分這些不同的激發光譜,所以尼康引入C1si光譜共聚焦。卡爾蔡司特別關注熒光顯微技術,它的顯微對比方法的特異性是其突出的優點,并且提出了“卡爾蔡司:熒光科學”口號。
對共聚焦系統的影響共聚焦顯微鏡制造商都一致認為,CCD探頭工藝的提高會對未來共聚焦系統產生重大的變革。從過去到現在,CCD的敏感性一直在不斷的提高,而且CCD探頭工藝的進一步提高將會對未來的共聚焦系統產生更重要的影響。CCD照相機敏感性的提高使共聚焦顯微鏡的分辨率接近點掃描共聚焦顯微鏡的水平,可以用來產生優質的結構圖像。一個顯微鏡同時擁有多個探頭技術也將會出現。CCD探頭工藝提高已經應用在卡爾蔡司共聚焦顯微鏡上。卡爾蔡司剛剛發布了一個新的快速共聚焦系統,即LSM5LIVE,它裝配了一種的線性探測頭。這個系統是其基于激光的共聚焦顯微鏡系統的一個補充產品。LSM510META是基于激光的共聚焦顯微鏡系統的旗艦產品,它的特征是應用了單通道和多通道光電倍增管工藝。它能夠實現將多個熒光圖像收集在一起,而不犧牲其清晰度和效率。
共聚焦顯微鏡是隨著計算機技術和光電技術的飛躍發展,在80年代后期發展起來的。它是在熒光顯微鏡成像的基礎上增加了激光掃描裝置,利用計算機進行圖像處理,使用紫外光或激光激發熒光探針,從而得到細胞或組織內部微細結構的熒光圖像,觀察細胞的形態變化或生理功能的改變。在醫學生物學領域,共聚焦顯微鏡可進行活細胞的動態觀察、細胞無損傷探測、免疫熒光標記和離子熒光探針的觀察和研究,等等。
和普通顯微鏡相比,共聚焦顯微鏡的優點是有目共睹的,用它可以掃描3-D圖像,并且有更高分辨率,可以產生質量更好的圖像,還可以控制掃描的深度。但是,因為共聚焦顯微鏡的高昂價格,使得很多資金不是十分寬裕的實驗室,對共聚焦顯微鏡只能是望而卻步。隨著技術的進步,共聚焦顯微鏡的操作更加簡單方便,而且價格也越來越便宜,使越來越多的實驗室能夠買得起,從而為科學家們提供*的研究工作站。
技術進步使共聚焦系統的操作簡化當前的科學研究問題越來越復雜,共聚焦系統工藝研究人員一直致力于把系統做得更加容易操作。如今,研究人員不斷的要求新功能和多樣性,這對系統的結實性和簡便性來說是一個挑戰。一方面,要滿足客戶對產品質量和多功能性提出的更新的要求,使得現在的系統做得越來越*;另一方面,這樣做加深了系統易操作之間的矛盾。
盡管如此,對于共聚焦系統,容易操作仍然被認為是重中之重。儀器使用者感覺到容易操作的是它的用戶界面,用戶界面必須簡單、直觀。例如,在使用尼康軟件的時候,不需要把所有用到的窗口全打開。控件被隱藏在標簽后面,這不但使界面更加簡潔,而且有效的防止了用戶的誤操作,這一點對于新用戶來說尤其重要。又如,卡爾蔡司開發人員認為,在設計和執行共聚焦圖像系統的時候,容易使用應該作為它的一個本質屬性。
在細胞生物學中的的應用奧林巴斯顯微鏡把FluoviewFV1000共聚焦系統應用在細胞生物學展示上,它的敏感性有很大提高,并且能在最小的標本損傷下實現活器官的高速掃描。其SIM掃描儀融合了兩個獨立的高度同步化的激光掃描儀,這種緊湊的設計使得它們能夠實現同步的激光刺激和共聚焦觀測。因此,可以在激光刺激后的瞬間,在沒有任何延時的情況下,捕獲到細胞產生的快速應激反應。
現在,科學家的研究范圍不僅僅局限在結構方面,還包括形態方面的研究。雖然如此,使用的仍然是對固定細胞和組織進行2-D和3-D成像。但是不管怎樣,對體外和體內狀態的一系列時間狀態下測得的圖像數據進行成像和定量分析,是以后發展的一個重要方向。
對共聚焦系統的影響共聚焦顯微鏡制造商都一致認為,CCD探頭工藝的提高會對未來共聚焦系統產生重大的變革。從過去到現在,CCD的敏感性一直在不斷的提高,而且CCD探頭工藝的進一步提高將會對未來的共聚焦系統產生更重要的影響。CCD照相機敏感性的提高使共聚焦顯微鏡的分辨率接近點掃描共聚焦顯微鏡的水平,可以用來產生優質的結構圖像。一個顯微鏡同時擁有多個探頭技術也將會出現。CCD探頭工藝提高已經應用在卡爾蔡司共聚焦顯微鏡上。卡爾蔡司剛剛發布了一個新的快速共聚焦系統,即LSM5LIVE,它裝配了一種的線性探測頭。這個系統是其基于激光的共聚焦顯微鏡系統的一個補充產品。LSM510META是基于激光的共聚焦顯微鏡系統的旗艦產品,它的特征是應用了單通道和多通道光電倍增管工藝。它能夠實現將多個熒光圖像收集在一起,而不犧牲其清晰度和效率。
所有共聚焦顯微鏡制造商都在致力于提高其研發水平和工藝水平,其中旋轉圓盤和點掃描型共聚焦系統是重點的研究對象。現在大約有5個公司基本上都采用相同的材料和工藝生產旋轉圓盤,以前的旋轉圓盤正在逐漸被淘汰,因為現在設計的旋轉圓盤只有一個針孔那么大小。尼康掃頻場共聚焦(SFC)是一個場掃描共聚焦,除了具有4個不同的針孔選擇和2個可利用的縫之外,它更像一個旋轉圓盤共聚焦顯微鏡。而卡爾蔡司的LSM5LIVE是現在掃描技術的一個重要的補充,這一點從使用過它的科學家那兒得到的反饋信息可以得到驗證。卡爾蔡司的技術人員總是能夠做到那些看起來不可能做到的事情,他們在不斷的提高共聚焦裝置的速度和敏感性,一直為提高活細胞成像的質量而努力。