阻濕態(tài)微生物穿透儀

濕態(tài)阻菌測(cè)試儀又稱為“ 阻濕態(tài)微生物穿透性測(cè)試儀”，RULLA 2濕態(tài)阻菌測(cè)試儀系標(biāo)準(zhǔn)ISO 22610 對(duì)阻濕態(tài)微生物穿透試驗(yàn)的儀器，也是中國(guó)食品標(biāo)準(zhǔn)YY/T 0506.6阻濕態(tài)微生物穿透試驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)儀器。

工作原理：

用鋼環(huán)將三層材料（試驗(yàn)材料在下，菌片居中，高密度聚乙烯膜在上面）卡在一起，將此環(huán)套件置于轉(zhuǎn)盤(pán)上的瓊脂培養(yǎng)皿上，試驗(yàn)指以能在整個(gè)培養(yǎng)皿表面上移動(dòng)的方式使材料受到壓力和摩擦的綜合作用，以此模擬在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中屏障材料可能發(fā)生的受力情況和濕態(tài)條件下的微生物穿透。菌片上的微生物穿透試驗(yàn)材料后會(huì)遷移到瓊脂培養(yǎng)基表面，通過(guò)對(duì)瓊脂培養(yǎng)皿的培養(yǎng)和菌落計(jì)數(shù)，可對(duì)試驗(yàn)材料的穿透性能進(jìn)行定量評(píng)價(jià)。

基本結(jié)構(gòu)：

該儀器有一個(gè)電驅(qū)動(dòng)、電子計(jì)時(shí)器控制、轉(zhuǎn)速為60rpm的轉(zhuǎn)盤(pán)，轉(zhuǎn)盤(pán)上可安裝一個(gè)14cm直徑的瓊脂培養(yǎng)皿。帶有試驗(yàn)指的平衡桿被一個(gè)轉(zhuǎn)速為5.60rpm的偏心軸所引導(dǎo)，可使重力為3±0.02N的試驗(yàn)指從轉(zhuǎn)盤(pán)的中心向周邊作側(cè)向的往復(fù)運(yùn)動(dòng)。在一個(gè)試驗(yàn)周期內(nèi)，兩個(gè)運(yùn)動(dòng)的疊加，能使試驗(yàn)指的作用軌跡均勻布滿整個(gè)圓盤(pán)表面。總重量為800±1g的內(nèi)外鋼環(huán)在試驗(yàn)中用以?shī)A持供試材料并對(duì)材料施加標(biāo)準(zhǔn)的繃緊力。儀器還附帶一個(gè)直徑9cm、高4cm的圓柱體，用于在三層材料的固定過(guò)程中提供平整的表面和統(tǒng)一的繃緊度。

阻濕態(tài)微生物穿透儀

試驗(yàn)方法：

1 菌片制備

ATCC 29213在大豆瓊脂上36℃±1℃下培養(yǎng)18-24h，將2-3個(gè)菌落接種至3ml大豆肉湯中，在36℃±1℃下培養(yǎng)18-24h。用蛋白胨水1:10稀釋至濃度為1×104CFU/mL~4×104CFU/mL，對(duì)終菌懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)。

打開(kāi)無(wú)菌袋取出仍貼附在智商的聚氨酯膜，將載菌材料片的可浸濕聚氨酯膜面朝上放在潔凈度盤(pán)子上，為了便于操作，用雙面膠帶將載菌材料片的四角固定于盤(pán)子上。用培養(yǎng)皿蓋作為模板在載菌膜上化出一個(gè)相應(yīng)的區(qū)域，在該區(qū)域涂布1.0ml懸浮液，然后將菌片到56℃干燥大約30min，在干燥期間采用消毒的玻璃涂布器在載菌膜上繼續(xù)涂布菌懸液，以使菌液均勻分布。

菌片制備好后當(dāng)日使用。

2 狀態(tài)調(diào)節(jié)

如需要，按照GB6529對(duì)試件進(jìn)行狀態(tài)調(diào)節(jié)，也可在標(biāo)準(zhǔn)正常室溫條件下進(jìn)行狀態(tài)天界和試驗(yàn)。狀態(tài)調(diào)節(jié)的方法應(yīng)記錄在試驗(yàn)報(bào)告中。

3 試驗(yàn)設(shè)定

調(diào)節(jié)控制桿上配重，使試驗(yàn)指施加到瓊脂上的力值為3N±0.02N。

將一個(gè)瓊脂培養(yǎng)皿放在轉(zhuǎn)盤(pán)上。

4 材料應(yīng)用

用下列計(jì)數(shù)：采用一個(gè)由內(nèi)、外環(huán)組成的圓形砝碼，總重800g±1g對(duì)材料施加標(biāo)準(zhǔn)的繃緊力。將圓柱放在內(nèi)環(huán)，再將試件覆蓋在圓柱體和內(nèi)環(huán)上，將除去貼附紙后的菌片染菌面向下放在試件上。后在聚氨酯膜上覆蓋一層HDPE膜，向下推緊外環(huán)，使三層材料牢固的加在兩個(gè)環(huán)之間。

5 試驗(yàn)

將上述環(huán)組件輕輕搭放在一個(gè)去下蓋子的瓊脂培養(yǎng)皿上，鋼環(huán)自由懸放于旋轉(zhuǎn)盤(pán)的外面，將試驗(yàn)指置于皿口內(nèi)測(cè)的HDPE膜上，這樣試件可與瓊脂表面接觸。試驗(yàn)指按上述規(guī)定施加3N壓力，是儀器運(yùn)行15min。

15min后立即取下環(huán)套件放在一邊。

從旋轉(zhuǎn)盤(pán)上取下一個(gè)培養(yǎng)皿并放上皿蓋。馬上將第二個(gè)培養(yǎng)皿和環(huán)套件放在旋轉(zhuǎn)盤(pán)上。

對(duì)后面的四個(gè)培養(yǎng)皿用同一個(gè)環(huán)套組件執(zhí)行上述步驟。

五個(gè)培養(yǎng)皿完成試驗(yàn)后，取下菌片并棄去，將試件反轉(zhuǎn)，上面朝下用HDPE膜覆蓋。

在第六個(gè)培養(yǎng)皿上操作15min,即完成一個(gè)平行試驗(yàn)組。

其余4片試件同樣按上述方法各運(yùn)行六個(gè)培養(yǎng)皿各15min，每片試件使用一片新鮮制備的菌片。

如果瓊脂表面聚有液體，將其置于潔凈臺(tái)上干燥，將各瓊脂培養(yǎng)皿加蓋置于36℃±1℃培養(yǎng)48h。

計(jì)數(shù)每只培養(yǎng)皿中菌落數(shù)，培養(yǎng)皿中心15min半徑區(qū)域內(nèi)的菌落數(shù)不計(jì)。

如果右一個(gè)皿或多個(gè)皿的計(jì)數(shù)大于750CFU（不包括上述的培養(yǎng)皿中心15min半徑區(qū)域內(nèi)的菌落數(shù)），可重新驚醒試驗(yàn)。如果重新試驗(yàn)仍有一個(gè)或多個(gè)皿計(jì)數(shù)大于750CFU，表明該材料不可能具有足夠的屏障特性，可終止試驗(yàn)。