植物組織培養(yǎng)室的滅菌

　　一、目的要求
1、通過實驗（experiment)，培養(yǎng)學生良好的衛(wèi)生觀念，確立組織培養(yǎng)的無菌意識。
2、掌握(熟知并能運用) 組織培養(yǎng)室的消毒及滅菌方法(method)。
3、掌握培養(yǎng)用具的干熱滅菌（fungus)的一般操作技術(shù)。

　　二、儀器與用具
1、用具：噴霧器、工作服、口罩、手套等。
2、藥品：2%新潔爾滅，，甲醛(Formaldehyde)，70%酒精。

　　三、方法步驟
（一）植物組織培養(yǎng)室的滅菌（fungus)
1、地面、墻壁和工作臺的滅菌：用2%新潔爾滅噴霧。
（1）配方：取新潔爾滅原液20ml，加水980ml，配成2%新潔爾滅溶液。
（2）方法(method)：將配好的2%新潔爾滅溶液倒入噴霧器內(nèi)，進行均勻噴霧。
（3）注意(attention)事項：

　　①墻壁、角落、地面噴霧要均勻，不要遺漏；

　　②注意安全，在噴房頂時，要特別小心，防止藥液霧滴掉入眼睛。
2、無菌室和培養(yǎng)室的滅菌：用甲醛(Formaldehyde)和熏蒸，1年中熏蒸1-2次。
（1）配方：每立方米空間用甲醛(aldehyde)(Formaldehyde)10ml加5g的配比液熏蒸。
（2）方法：shou先房子要密封。然后在房子中間放一口缸或大燒杯，將稱好的放入缸內(nèi)，再把已稱量的甲醛(aldehyde)溶液慢慢倒入缸內(nèi)，完畢，人迅速離開，并關(guān)上門，密封3天。
（3）注意的地方：

　　①操作前要戴好口罩及手套；

　　②倒入甲醛時要小心，因為甲醛遇到(Potassium)會迅速沸騰，并產(chǎn)生大量煙霧。壓力蒸汽滅菌器具有造型新穎美觀、結(jié)構(gòu)合理、功能齊全、加熱迅速、滅菌*等優(yōu)點。適用于醫(yī)療、科研、食品、等單位對手術(shù)器械、敷料、玻璃器皿、橡膠制品、食品、藥液、培養(yǎng)基等物品進行滅菌。操作時人要迅速避開煙霧；

　　③3天后，打開房間，搬走費液缸；一周后，方可進入操作。壓力蒸汽滅菌器具有造型新穎美觀、結(jié)構(gòu)合理、功能齊全、加熱迅速、滅菌*等優(yōu)點。適用于醫(yī)療、科研、食品、等單位對手術(shù)器械、敷料、玻璃器皿、橡膠制品、食品、藥液、培養(yǎng)基等物品進行滅菌。
3、在已經(jīng)熏蒸過的房間(room)內(nèi)，用70%酒精紗布擦洗培養(yǎng)架、工作臺。
4、用紫外燈照射20—30min。
5、使用前，再用70%酒精噴霧，使空間灰塵落下。
（二）培養(yǎng)基的滅菌——高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌法）
（1）洗滌：把組織培養(yǎng)基用的培養(yǎng)皿、三角瓶、試管等玻璃器皿進行*清洗。自然晾干或烘箱干燥。
（2）包扎：用牛皮紙、報紙、紗布或錫(xī)箔紙把玻璃材質(zhì)器皿和金屬器械分別包扎好。生物安全柜可保護工作人員和環(huán)境而不保護樣品。氣流原理和實驗室通風櫥一樣，不同之處在于排氣口安裝有HEPA過濾器。所有類型的生物安全柜都在排氣和進氣口使用HEPA過濾器。
（3）裝水：在壓力蒸汽滅菌器內(nèi)裝入一定量的水（水要淹沒電熱絲）。（切忌干燒！）
（4）裝物品：在滅菌鍋內(nèi)放入含培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶或三角瓶、裝蒸餾水的玻璃瓶，以及包扎好的玻璃器皿(ware)和金屬器械等。
（5）滅菌（fungus)：將排氣閥開著，加熱，直**鍋內(nèi)釋放(release)出大量水蒸氣（此時水蒸氣橫向噴出），再關(guān)閉閥們；或者當鍋內(nèi)壓力升**49.0KPa時，開啟排氣閥，將鍋內(nèi)的冷空氣全部排出。當鍋內(nèi)壓力達到108KPa時，溫度為121℃時，維持15-20分鐘，即可達到滅菌的目的。（若滅菌時間過長，會使培養(yǎng)基中的某些成分變性失效。）切斷電源，讓滅菌鍋自然冷卻(cooling)。
注意：
　　①先打開放氣閥，再打開鍋蓋。（以免鍋內(nèi)壓力大而爆炸！）

　　②開蓋后應(yīng)盡快轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶，使培養(yǎng)瓶冷卻(cooling)、凝固。一般應(yīng)將滅菌（fungus)后的培養(yǎng)瓶儲藏于30℃以下的室內(nèi)(indoor)，**好儲藏在4-10℃的條件下。

　　③某些生長調(diào)節(jié)劑如IA
　　A、Z
　　
　　T、ABA等以及某些維生素遇熱是不穩(wěn)定的，不能同培養(yǎng)基共同高壓滅菌，而需要進行過濾滅菌。
2、培養(yǎng)用具的滅菌——干熱滅菌法
（1）玻璃材質(zhì)器皿的滅菌：濕熱滅菌法或干熱滅菌法。
（2）金屬器械的滅菌(Sterilization)：干熱滅菌或火焰滅菌法。
（3）布質(zhì)制品的滅菌（fungus)：均用濕熱滅菌法。（注意：布質(zhì)制品jue不能干熱滅菌！）
干熱滅菌方法：
（1）洗滌：把組織培養(yǎng)用的培養(yǎng)皿、三角瓶、試管、移液管等玻璃器皿進行*清洗。（2）包扎：玻璃器皿可放在大的玻璃容器中，金屬(Metal)器械可放在金屬盒內(nèi)。
（3）滅菌：器皿在烘箱中，150℃，干熱滅菌1小時；或120℃，2小時。滅菌完畢，待冷卻(cooling)后取出。