一種從豬胰臟中提取純化彈性蛋白酶的方法，它是將豬胰臟經過絞碎后形成胰糜，后者采用提取液進行提取后經過板框過濾、超濾后，采用離子交換樹脂進行吸附，洗脫液用反膠束萃取方法進行正萃取和反萃取步驟，反萃取出來的彈性蛋白酶組分經過超濾脫鹽濃縮和冷凍干燥后獲得高純度的彈性蛋白酶產品。本發明制得的彈性蛋白酶產品生物活性達到1200IU/mg以上，比活超過2200IU/mg·p，產品經SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定，分子量約25900Da，且電泳為單一帶，可以作為醫藥工業用彈性蛋白酶制劑的原料。本發明的工藝路線也可以用于從豬胰臟中提取純化其他種類的蛋白酶及生物活性分子。
1.一種從豬胰臟中提取純化彈性蛋白酶方法，它包括反膠束萃取體系的建立和純化彈性蛋白酶的親和反膠束工藝，其特征是方法步驟如下：(1)反膠束萃取體系的建立：建立以琥珀酸二(2-*己基)酯 十六*三甲*銨為表面活性劑，以醇類和辛烷按1∶1-1∶10體積比混合的有機溶劑為表面活性劑溶劑的反膠束體系，組成的反膠束體系對彈性蛋白酶具有良好的親和性和選擇性，

具體操作步驟為：取活性為100IU/mg左右的彈性蛋白酶粗提液100mL與一定體積的AOT/*/*或十六*三 銨/正*/*反膠束溶液攪拌混勻一定時間，達到萃取平衡，使反膠束與彈性蛋白酶充分作用，然后靜置分相，取下層水相中樣品測定彈性蛋白酶活性和蛋白含量，計算萃取率，對于反萃取步驟：吸取上層有機相與等體積的鹽溶液混勻20分鐘后，靜置分相，取下層水相，測定彈性蛋白酶活性和蛋白含量，計算反萃取率，以萃取率和反萃取率分別優化反膠束種類、有機溶劑配比、表面活性劑的終濃度、正萃取時間、正萃取的鹽離子濃度和pH、反萃取的鹽離子種類、濃度和pH等參數，建立的適合純化彈性蛋白酶的反膠束萃取條件為：正萃取步驟中靜置分相的時間為5-30分鐘，正萃取鹽離子濃度為0.5-3mol/L、pH值在1-3之間，反萃取劑pH為5-10、鹽離子濃度為0-0.5mol/L，反萃取劑*優為NaAc、Na2CO3或KAc溶液，此時反膠束溶液對彈性蛋白酶的活性回收率平均達到90％以上，

彈性蛋白酶活性從100IU/mg左右提高到1200IU/mg以上，比活達到2500IU/mg p以上；(2)純化彈性蛋白酶的親和反膠束工藝：取新鮮豬胰臟，經過二次絞碎并磨漿之后，在pH8.0，25℃，0.01mol/L CaCl2和攪拌情況下，*2-5小時，形成胰糜，胰糜經過8倍體積0.1mol/L pH4.5HAc醋酸提取3小時之后，進行板框過濾，濾液用50-100kD和10kD超濾膜過濾后得到彈性蛋白酶粗提液，彈性蛋白酶粗提液采用強酸性陽離子交換樹脂對目的產物進一步濃縮和富集，同時為后續的反膠束萃取體系做準備，彈性蛋白酶粗提液中加入適量再生好的吸附劑，4℃攪拌吸附2-4小時，過濾，得到的吸附物裝柱，用pH4.0，0.1mol/L*緩沖液洗滌4-5柱床，再用pH4.0，的醋酸-*溶液洗脫1.5柱床，收集洗脫液，洗脫液直接用(1)中優化的反膠束萃取體系進行正萃取和反萃取操作，反萃取洗脫液采用截留分子量為10KD的超濾膜進行超濾濃縮后，進行冷凍干燥得彈性蛋白酶