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本發(fā)明公開了一種微生物發(fā)酵和膜分離技術(shù)耦合生產(chǎn)γ-聚的方法。本發(fā)明針對發(fā)酵過程中由于產(chǎn)物聚導(dǎo)致發(fā)酵液的粘度不斷升高，嚴(yán)重影響發(fā)酵過程中的菌體生長和溶氧供應(yīng)等難題，提出發(fā)酵與分離相耦合的方法，其步驟包括菌種活化，種子培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)，微濾膜過濾，超濾濃縮和補(bǔ)料。采用此方法可以使發(fā)酵液黏度維持在較低水平，從而有利于增加發(fā)酵罐中的溶氧，降低產(chǎn)物的高黏度對菌體生長的抑制作用，提高γ-PGA的產(chǎn)量和發(fā)酵產(chǎn)率，降低了生產(chǎn)成本，并有利于發(fā)酵液的后處理和產(chǎn)物的精制。該方法操作條件溫和，穩(wěn)定性好，快速*，設(shè)備簡單，投入低，對微生物發(fā)酵制備高黏度生物聚合物的生產(chǎn)具有普遍的指導(dǎo)意義，在工業(yè)界具有廣闊的應(yīng)用前景。
1、一種微生物發(fā)酵和膜分離技術(shù)耦合生產(chǎn)γ-聚的方法，其特征在于包括如下步驟：(

：(1)菌種活化：從冷凍甘油管中取10微升菌液，稀釋后涂布于分離培養(yǎng)基，37℃，培養(yǎng)12h；(2)種子培養(yǎng)：將活化后的菌種接種到含種子培養(yǎng)基的種子瓶中，在37℃轉(zhuǎn)速200rpm條件下培養(yǎng)12h，枯草芽孢桿菌種子培養(yǎng)基：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl 5g/L，pH6.5；(3)發(fā)酵培養(yǎng)：生物反應(yīng)器中，枯草芽孢桿菌在發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)得到富含γ-聚的發(fā)酵液，枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖60g/L，蛋白胨60g/L，鈉80g/L，NaCl 10g/L，MgSO4·7H2O 1.0g/L，CaCl21.0g/L，pH6.5；(4)微濾膜過濾：枯草芽孢桿菌在生物反應(yīng)器中發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵液黏度和細(xì)胞密度增加至30～40mPa.min時，開啟微濾系統(tǒng)，發(fā)酵液進(jìn)入微濾裝置進(jìn)行過濾，截留液返回生物反應(yīng)器中，濾過液進(jìn)入濃縮池；(5)超濾濃縮：濃縮池內(nèi)的液體積累到2～2.5L，開啟超濾系統(tǒng)進(jìn)行濃縮和脫色，截留液返回濃縮池形成濃縮液，透過液返回到生物反應(yīng)器中。(6)補(bǔ)料 培養(yǎng)基以1.0ml/min的速度泵入發(fā)酵罐內(nèi)，維持細(xì)胞生長和合成聚的能力。