
本發(fā)明提供了一種新的轉(zhuǎn)氨酶制備方法,其步驟包括首先選擇一株高產(chǎn)轉(zhuǎn)氨酶轉(zhuǎn)基因菌株,經(jīng)過(guò)放大培養(yǎng)后接種4%量于種子培養(yǎng)基,30℃,210r/min培養(yǎng)24h后按8%接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)。發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程中采用分批補(bǔ)料發(fā)酵法培養(yǎng),有效地解決了發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)物抑制作用和蛋白質(zhì)交聯(lián)反應(yīng)等,還通過(guò)變溫法縮短細(xì)胞生長(zhǎng)延滯期,減少總發(fā)酵時(shí)間提高糖的利用率和轉(zhuǎn)氨酶的發(fā)酵水平 后,采用超濾-真空濃縮法分離和純化轉(zhuǎn)氨酶,通過(guò)該法制得的轉(zhuǎn)氨酶酶活力高,產(chǎn)率高,操作比較簡(jiǎn)便,適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
一種轉(zhuǎn)氨酶制備方法,其特征包括以下幾個(gè)步驟:(1)菌種選擇選擇了一株產(chǎn)轉(zhuǎn)氨酶轉(zhuǎn)基因菌株,
該菌株是通過(guò)將來(lái)自茂原鏈霉菌產(chǎn)轉(zhuǎn)氨酶基因克隆分離后,構(gòu)成該基因原核表達(dá)載體,并通過(guò)輪枝鏈霉菌表達(dá)。(2)菌種培育將斜面培養(yǎng)基上的菌種以4%的接種量接入種子培養(yǎng)基,于30℃,210r/min培養(yǎng)24h。(3)搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)以8%的接種量,將種子培養(yǎng)基菌種接入發(fā)酵培養(yǎng)基,于32℃,210r/min培養(yǎng)18h,降低溫度至28℃,培養(yǎng)24h。(4)補(bǔ)料發(fā)酵發(fā)酵液發(fā)酵24h時(shí),補(bǔ)加1.5%甘油作為碳源,同時(shí)添加1.5%蛋白胨作為氮源培養(yǎng)18h。(5)轉(zhuǎn)氨酶提取將發(fā)酵液以4000r/min離心20min,上清液為粗酶液,粗酶液經(jīng)微濾膜微濾處理,進(jìn)一步除去*等雜質(zhì),濾液再經(jīng)超濾膜處理,截留得到的產(chǎn)物再經(jīng)真空濃縮后,噴霧干燥得到純的轉(zhuǎn)氨酶。





















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