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【產(chǎn)品概述】

Western及IP細胞裂解液(無抑制劑)是一種常用的細胞組織快速裂解液，主要成分為20mM Tris(pH7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，不含蛋白酶、磷酸酯酶等抑制劑。Western及IP細胞裂解液(無抑制劑)裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的WB，IP， co-IP。

使用本裂解液時，用戶可以根據(jù)具體用途自行添加特定抑制劑。

【保存條件】

-20℃，一年有效。

【使用方法】

對于培養(yǎng)細胞樣品：

1、融解Western及IP細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，根據(jù)需要自行確定添加適當?shù)囊种苿┗虿惶砑右种苿?/p>

2、對于貼壁細胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解。

對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解。

3、充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入100微升裂解液即可，但如果細胞密度非常高可以適當加量到150微升或200微升。每100萬細胞用100微升本產(chǎn)品裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為2-4mg/ml，不同細胞有所不同。

對于組織樣品：

1、把切成細小的碎片。

2、融解Western及IP細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，根據(jù)需要自行確定添加適當?shù)囊种苿┗虿惶砑右种苿?/p>

3、按照每20毫克組織加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。)

4、用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5、充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。每20mg凍存的小鼠肝臟組織用200微升本裂解液裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為15-25mg/ml，不同狀態(tài)的不同組織有所不同。

6、如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈渦旋使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

【注意事項】

1、如需添加蛋白酶抑制劑等，需自行準備。

2、裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。

3、對于某些特殊蛋白的IP，若Western及IP細胞裂解液效果不是非常理想，可以嘗試用RIPA裂解液(強、中或弱)或NP-40裂解液。如果IP的時候背景很高，則應(yīng)考慮選用裂解強度較高的裂解液，例如RIPA裂解液(強或中)。如果發(fā)現(xiàn)目的蛋白無法被IP下來，則說明裂解液的強度過強，可以使用較為溫和的裂解液例如RIPA裂解液 (弱)或NP-40裂解液。

4、對于某些難溶解蛋白的Western，如果發(fā)現(xiàn)Western及IP細胞裂解液 (P0013)效果不是非常理想，可以嘗試使用裂解強度更高的裂解液例如RIPA裂解液(強、中)或SDS裂解液。

5、本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

6、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。