海藻糖酶測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注?意: 正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
THL(EC 3.2.1.28)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。海藻糖酶主要功能在于生物體分解海藻糖生成葡萄糖而直接用于能量供應(yīng)。測(cè)定原理:
THL 催化海藻糖產(chǎn)生葡萄糖,葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并產(chǎn)生;過氧化物酶催化氧化 4-氨基偶聯(lián)酚,生成有色化合物,在 505 nm 有特征吸收峰,以此反映 THL 活性。需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。樣品測(cè)定的準(zhǔn)備:
1、細(xì)胞的處理:收集或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3S,間隔 10S,重復(fù) 30 次);8000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。2、組織的處理:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),冰浴中勻漿。8000g ,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
3、血清(漿)的處理:按照血清(漿)體積(mL):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議取 0.1mL 血清(漿)加入 1mL 提取液),冰浴中勻漿。8000g ,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
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