輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)試盒
測(cè)定方法: 分光光度法
測(cè)定規(guī)格: 50管/24樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意: 正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
輔酶ⅡNADP(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,NADP+和NADPH含量測(cè)定可以計(jì)算NADP(NADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值,其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。NADPH/NADP+比值不僅是細(xì)胞氧化還原態(tài)的主要標(biāo)志之一,而且在PPP途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用。
測(cè)定原理:
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NADP+和NADPH。NADPH通過(guò)PMS的遞氫作用,使氧化型噻唑藍(lán)(MTT)還原為甲瓚,570nm下檢測(cè)吸光值,從而測(cè)定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄-糖脫氫酶還原NADP+為NADPH,從而檢測(cè)NADP+含量。
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
酸性提取液：50mL×1瓶，4℃保存；
堿性提取液：50mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體15 mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1支，-20 ℃保存，用時(shí)加入4mL蒸餾水，混勻；用不完的試劑4℃保存一周；
試劑三：粉劑×1支，-20℃保存，用時(shí)加入4mL蒸餾水，混勻；用不完的試劑4℃保存一周；
試劑四：粉劑×1支，4 ℃保存，用時(shí)加入4mL蒸餾水，混勻；用不完的試劑4℃保存一周；
試劑五：液體1.8mL×1支，4 ℃保存；
試劑六：液體30mL×1瓶，4 ℃保存；
試劑七：液體50mL×1瓶，4 ℃保存。
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