超氧陰離子(OFR)測試盒
測定方法: 微量法
測定規(guī)格: 100T/96S
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意: 正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號傳導的作用,但積累過多時會對細胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞作用,導致機體細胞和組織代謝異常。
測定原理:
超氧陰離子與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2-,NO2-在對氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下,生成紅色的偶氮化合物,在530nm處有特征吸收峰,根據(jù)ΔA值可以計算樣品中O2-含量,反應(yīng)式為NH2OH + 2O2- +H+ → NO2- + H2O2 + H2O。
自備實驗用品及儀器:
天平、水浴鍋、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、氯仿和蒸餾水。
超氧陰離子提取:
1.?植物、動物組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液)進行冰浴勻漿,然后,10000g,4℃,離心 20min,取上清置于冰上待測。
2.按照細胞數(shù)量(104 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細胞加入 1mL 提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min);然后 10000g,4℃,離心 20min,取上清置于冰上待測。
3.?血清或培養(yǎng)液:直接測定。
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