酶(CAT)測試盒
測定方法: 分光光度法
測定規格: 50管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意 : 正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定注 意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
測定原理:
H2O2在240nm下有特征吸收峰,CAT能夠分解H2O2,使反應溶液240nm下的吸光度隨反應時間而下降,根據吸光度的變化率可計算出CAT活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制:
提取液:60mL×1瓶,4℃保存;
工作液:60mL×1瓶,4℃保存;
粗酶液提取:
1、細胞或組織樣品的制備:
培養細胞:先收集或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定步驟:
1、分光光度計預熱30min以上,調節波長至240nm處,蒸餾水調零。
2、測定前將CAT檢測工作液37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min。
3、在1mL石英比色皿中加入35μL樣本和1mL工作液,混勻,室溫下立即測定240nm下的初始吸光值A1和1min后的吸光值A2,計算ΔA=A1-A2
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