柱前衍生同時分析18種氨基酸
島津氨基酸分析包樣品信息:
18種氨基酸 出峰順序依次為1--天冬氨酸ASP、2--GLU、3--SER、4--Gln、5--HIS、6--GLY、7--THR、8--瓜氨酸CIT、9--ARG、10--ALA、11--TYR、12--半CYSTINE、13--VAL、14--蛋氨酸MET、15--苯PHE、16--異ILE、17-LEU、18--賴氨酸LYS
檢測目的:在線柱前衍生分析18種氨基酸
島津氨基酸分析包檢測原理:
島津prominence 20A UFLC系統升級后,可以在定量環內實現柱前在線衍生。
衍生時,進樣針首先吸取硼酸buffer到定量環(硼酸buffer pH值7.0,在堿性條件下衍生效果更好)----再吸取OPA和3-巰基丙酸的混合液(OPA衍生一級胺,3-巰基丙酸保護氨基酸),----再吸取FMOC(FMOC衍生二級胺)----zui后吸取氨基酸標準品溶液---混合充分反應,進樣分析。
檢測方法:標準品儲備液,稀釋后衍生進樣分析
分析儀器:島津prominence 20A UFLC系統
條件:
| 色譜柱: | Inertsil ODS-4 3um 4.6150mm 貨號:5020-04045 |
| 流動相: | A:水(40mM磷酸鹽,Ph7.0) B:乙腈/甲醇/水=45:45:10 |
| 流速: | 1.0ml/min |
| 柱溫: | 40℃ |
| 檢測器: | UV,262nm、338nm |
| 進樣量: | 1ul |
| 衍生劑配制方法: | |
| OPA配制: | 10mgOPA溶于1ml溶液(0.16ml甲醇+0.14ml硼酸緩沖液+0.7ml純水) |
| 3-巰基丙酸: | 10ul 3-巰基丙酸用純水稀釋至1ml |
| 硼酸緩沖液: | 0.1mol/L,用0.4mol/L的*調節pH值至10 |
| FMOC: | 10mgFMOC溶于1ml乙腈 |
| 梯度條件,見表1: |
| time(min) | Module | Command | Value |
|---|---|---|---|
| 2.5 | pumps | pump B Conc | 13 |
| 2.51 | pumps | pump B Conc | 15 |
| 10 | pumps | pump B Conc | 16 |
| 15 | pumps | pump B Conc | 35 |
| 26 | pumps | pump B Conc | 42 |
| 26.01 | pumps | pump B Conc | 100 |
| 29.5 | pumps | pump B Conc | 100 |
| 29.51 | pumps | pump B Conc | 12 |
| 35 | controller | stop |
圖譜如下:
圖譜1
重現性:
| 峰號 | RSD%(RT) | RSD%(Area) |
|---|---|---|
| 1 | 0.16 | 1.84 |
| 2 | 0.05 | 2.18 |
| 3 | 0.1 | 0.72 |
| 4 | 0.09 | 0.70 |
| 5 | 0.08 | 1.09 |
| 6 | 0.09 | 1.07 |
| 7 | 0.09 | 0.73 |
| 8 | 0.1 | 0.85 |
| 9 | 0.1 | 1.03 |
| 10 | 0.06 | 0.66 |
| 11 | 0.04 | 0.87 |
| 12 | 0.06 | 0.88 |
| 13 | 0.06 | 0.65 |
| 14 | 0.07 | 0.97 |
| 15 | 0.09 | 0.86 |
| 16 | 0.05 | 0.67 |
| 17 | 0.09 | 0.77 |
| 18 | 0.11 | 0.93 |
圖2 保留時間與峰面積重現性圖譜


所有評論僅代表網友意見,與本站立場無關。