分子熒光光譜法與化學發光分析法

物質的基態分子吸收能量（電能、熱能、化學能和光能等）被激發到較高電子能態，從不穩定的激發態躍迂回基態并發射出光子，此種現象稱為發光?；诜肿影l光建立起來的方法稱為分子發光光譜法(molecular luminescence spectrometry)。分子發光光譜法包括分子熒光光譜法（molecular fluorescence spectrometry）、分子磷光光譜法(molecularosphorescence spectrometry）、化學發光分析法（chemiluminometry）和生物發光法(bioluminescence)。
熒光和磷光同屬光致發光，發射熒光時電子能量轉移不涉及電子自旋改變，熒光壽命較短（10^-11～10^-7 S）。熒光是由單重態—基態躍遷產生的，受激發的自旋狀態不發生變化。磷光是由三重態—基態躍遷產生的，發射磷光時伴隨電子自旋的改變，在輻射停止幾秒或更長一段時間后，仍能檢測到磷光，磷光壽命略長(10^-4～10 s)。
化學發光是指某些物質在進行化學反應時，由于吸收了反應時產生的化學能，反應產物分子由基態激發至激發態，受激分子由激發態再回到基態時，發出一定波長光的過程。生物發光是指生物體發光或生物體提取物在實驗室中發光的現象，是由細胞合成的化學物質，在一種特殊酶的作用下，將化學能轉化為光能。
分子熒光光譜法的基本原理:
分子受光能激發后，由電子激發單重態(S1)躍迂回到基態的任一振動能級時所發出的光輻射稱為分子熒光。由于分子對光的吸收具有選擇性，因此熒光的激發和發射光譜是熒光物質的基本特征。測定激發光譜時，通常是在一定的狹縫寬度下，固定待測物質的發射波長，然后改變激發光的波長，測量不同激發光波長所產生的熒光強度的變化。熒光強度處所對應的激發波長就是宜的激發波長，稱為激發波長。此時分子吸收的能量，能產生的熒光。測定發射光譜時，是將激發光波長固定在激發波長處，然后不斷改變熒光的發射波長，測定不同的發射波長處的熒光強度的變化。通常用λex和λem分別表示激發波長和發射波長。激發光譜和發射光譜可用于鑒別熒光物質，并可作為熒光測定時選擇激發波長和測定波長的依據。
在一定條件下儀器所測得熒光物質發射熒光的大小用熒光強度來衡量。熒光是向四周發射的，沒有固定方向，是各向同性的，因此實際上測量的是某一方向的熒光強度。熒光是光致發光，而物質吸收光以后再發射光，所以熒光強度應與入射的光強度以及熒光量子產率成正比。熒光強度與濃度成正比。需要指出的是，這樣的正比關系式只有在被測物的濃度較低時才成立。

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