3-磷酸甘油酸激酶(PGK)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100T/96S
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意: 正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的關(guān)鍵酶,廣泛存在于動(dòng)植物和微生物體內(nèi),催化1,3-二磷酸甘油酸轉(zhuǎn)變?yōu)?-磷酸甘油酸,產(chǎn)生1分子ATP,具有影響DNA復(fù)制和修補(bǔ)及刺激病毒RNA合成等生物學(xué)功能,廣泛應(yīng)用于靶標(biāo)設(shè)計(jì)。
測(cè)定原理:
3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP產(chǎn)生1,3-二磷酸甘油酸和ADP,1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脫氫酶和NADH作用下產(chǎn)生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸,340nm處的吸光度變化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。
酶液提取:
①總 PGK 酶提取:建議稱取約 0.1g 樣本,加入 1mL 提取液,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎 3s,間歇 7s,總時(shí)間 1min),然后 4℃,500g 離心 5min,取上清測(cè)定。②胞漿和葉綠體 PGK 酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 樣本,加入 1mL 提取液),冰浴勻漿后于 4℃,500g 離心 5min,棄沉淀,取上清在 4℃,8000g 離心 10min,取上清用于測(cè)定胞漿 PGK 酶活性,取沉淀加 1mL 提取液,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎 3s,間歇 7s,總時(shí)間 1min),然后 4℃, 500g 離心 5min,取上清測(cè)定葉綠體中 PGK 酶活性。
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