果糖-6-磷酸果糖激酶(PFK)/6磷酸果糖激酶/果糖6磷酸激酶測試盒
測定方法: 微量法
測定規格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意 : 正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
PFK(EC 2.7.1.11)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,負責將果糖-6-磷酸和ATP轉化為果糖-1,6二磷酸和ADP,是糖酵解過程的關鍵調節酶之一。
測定原理:
PFK催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-1,6-二磷酸和ADP,丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下測定NADH下降速率,即可反映PFK活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理:
1、培養細胞:先收集或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為1000~5000:1的比例(建議2000萬或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
3、血清(漿)樣品:直接檢測。
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