順烏頭酸酶(ACO)測試盒
測定方法: 微量法
測定規格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 ?意: 正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
順烏頭酸酶(aconitase),三羧酸循環中的酶,催化檸檬酸轉變為異檸檬酸。檸檬酸本身不易氧化,在順烏頭酸酶作用下,通過脫水與加水反應,使羥基由β碳原子轉移到α碳原子上,生成易于脫氫氧化的異檸檬酸,為進一步的氧化脫羧反應作準備。測定原理:
ACO 催化檸檬酸轉化成異檸檬酸,異檸檬酸氧化脫羧將 NAD+ 還原生成 NADH,導致 340nm 處光吸收上升。需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。樣本的前處理:
組織、或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:1、稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細胞,加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、將勻漿轉入離心管內 600g,4℃離心 5min。
3、棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心 10min。
4、上清液即胞漿提取物,可用于測定胞質順烏頭酸酶活性。
5、在步驟④的沉淀中加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率 20%或200W,超聲 3 秒,間隔 10 秒,重復 30 次),用于線粒體順烏頭酸酶活性測定。
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