檸檬酸合酶(CS)測試盒
測定方法: 微量法
測定規格: 100管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注?意:正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中,是三羧酸循環 個限速酶,是三羧酸循環主要調控位點之一。測定原理:
CS 催化乙酰 CoA 和草酰乙酸產生檸檬酰輔酶 A,進一步水解產生檸檬酸;該反應促使無色的 DTNB 轉變成黃色的 TNB,在 412nm 處有特征吸光值。需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水樣本的前處理:
組織、或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:①稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細胞,加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
②將勻漿 600g,4℃離心 5min。
③棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心 10min。
④上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的 CS(此步可選做)。
⑤在步驟④的沉淀中加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率 20%或200W,超聲 3 秒,間隔 10 秒,重復 30 次),用于線粒體 CS 測定。
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