單克隆篩選工作原理：

單克隆篩選的重要性：

   在單抗開發(fā)領(lǐng)域中，細(xì)胞株的構(gòu)建關(guān)鍵環(huán)節(jié)是要篩選高表達細(xì)胞的單克隆，這是FDA等監(jiān)管部門的要求，也是確保抗體藥穩(wěn)定性的重要依據(jù)。在以往的細(xì)胞株構(gòu)建環(huán)節(jié)中，用戶往往采用手動的有限稀釋法往96孔板中鋪細(xì)胞。一般他們會按照0.5或者0.3個細(xì)胞每孔，進行細(xì)胞鋪板。按照泊松分布的規(guī)律，會有30%-40%的孔中能進去單細(xì)胞，其余的孔含有的細(xì)胞數(shù)為零個或者兩個以上。接下來還要觀察孔中的細(xì)胞生長情況，通常會采用孔板成像設(shè)備對細(xì)胞生長狀態(tài)進行跟蹤拍照觀察，一般會在鋪板完成當(dāng)天也就是第0天，第1天，第3天......進行拍照存檔，為后期確定單克隆提供關(guān)鍵證據(jù)。

   上述手動有限稀進行單克隆篩選，是操作極為簡單且成本極低的方式，但是同時效率也是很低的。為了確保更多的孔中鋪進去的是單細(xì)胞，所以鋪板的初始細(xì)胞密度不能過高，所以30%-40%的孔中為單細(xì)胞已經(jīng)是極限了。在這種情況下，還要考慮本身的細(xì)胞狀態(tài)和培養(yǎng)基條件，后每塊96孔板能獲得的單克隆多也就在10個左右。按照這個比例，如果用戶需要收集100個單克隆，至少需要鋪10塊96孔板。鋪板數(shù)量上升，隨之帶來的鋪板時間變長之外，成像拍照的時間也大大上升，往往后者帶來的影響更大。所以為了節(jié)省整個流程的時間，提高每塊板子鋪板時單細(xì)胞比例變得極其重要。

   Namocell單細(xì)胞分離儀采用微流控技術(shù)，能夠在1-2min內(nèi)快速完成96孔板的鋪板工作，單細(xì)胞效率在90%左右，而且分離過程輕柔，對細(xì)胞影響很小，能夠確保單細(xì)胞順利生長。具體分離原理和特點參見本站其他文章。