肉桂酸-4-羥化酶(C4H)測試盒
測定方法: 微量法
測定規(guī)格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注? 意: 正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
C4H 又稱反式肉桂酸-4-單氧化酶,多存在于高等植物、酵母、菌類中,該酶催化肉桂酸羥化作用產(chǎn)生 4-香豆酸鹽,是苯丙烷途徑中繼 L-苯解氨酶之后的 個關(guān)鍵酶。
測定原理:
C4H 催化肉桂酸和 NADP 生成 4-香豆酸鹽和 NADPH,在 340nm 下測定 NADPH 生成速率,即可反映 C4H 活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提取:
培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照或細(xì)胞數(shù)量(104 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
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