線粒體呼吸鏈復合體Ⅲ/CoQ-還原酶測試盒
測定方法: 微量法
測定規格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意 : 正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
線粒體復合體Ⅲ(EC 1.10.2.2)又稱CoQ-還原酶,廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體中,是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分,負責把還原型CoQ的氫傳遞給,生成還原型。
測定原理:
與氧化型不同,還原型在550nm有特征光吸收,因此550nm光吸收增加速率能夠反映線粒體復合體Ⅲ酶活性。
樣本的前處理:
組織或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:
1、準確稱取0.1g組織或收集500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、將勻漿600g,4℃離心5min。
3、棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。
4、上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白,可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅲ(此步可選做)。
5、步驟④中的沉淀即為線粒體,加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10秒,重復30次),用于復合體Ⅲ酶活性測定。
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