Ca++Mg++ ——ATP酶測試盒
測定方法:     微量法
測定規格:    100管/48樣
保存條件:     低溫避光保存
有 效 期:     6個月
注    意:       正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:
Ca++ Mg++-ATP酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細胞中,可催化ATP水解生成ADP和無機磷。

測定原理:
根據Ca++ Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及無機磷,通過測定無機磷的量來確定ATP酶活性高低。

需自備的儀器及用品:
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

樣品酶液的制備:
1、細胞或組織樣品的制備:
培養細胞:先收集或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。

注意事項:
1、由于每一個樣都必須做對照,本試劑盒100管只能測 48份Ca++ Mg++-ATP酶。
2、此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管要求嚴格無磷。避免磷污染是檢測成敗的關鍵。
3、空白管和標準管只要做一管。
Ca++ Mg++-  ATPase活力的計算:
1、血清(漿)Ca++ Mg++-  ATPase活力的計算:
定義:每小時每毫升血清(漿)中Ca++ Mg++- ATP 酶分解ATP 產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h/mL)= [C標準管×V總]×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷V樣÷T=7.5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)
2、組織、或細胞中Ca++ Mg++-  ATPase活力的計算:
(1)按蛋白濃度計算:
定義:每小時每毫克組織蛋白中Ca++ Mg++- ATP 酶分解ATP 產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h / mg prot)= [C標準管×V總]×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷(V樣×Cpr)÷T =7.5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
定義:每小時每克組織中Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h /g 鮮重)=[C標準管×V總]×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷(W× V樣÷V樣總)÷T=7.5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷W
(3)按或細胞密度計算:
定義:每小時每1萬個或細胞中Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h /104 cell)= [C標準管×V總]×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.015×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)

C標準管:標準管濃度,0.5μmol/mL;V總:酶促反應總體積,0.25mL;V樣:加入樣本體積,0.1mL ;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,1/6小時;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:或細胞總數,500萬。