測定方法: 微量法
測定規格: 100T/96S
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意: 正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
HYP是機體膠原蛋白主要成分之一,膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和等,因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標。測定原理:
樣品經水解產生游離的HYP,進一步被氯胺T氧化,氧化產物與對二甲氨基苯甲醛反應,產生紅色化合物,在560nm處有特征吸收峰。通過測定樣品水解液560nm吸光值,可計算HYP含量。
自備實驗用品及儀器:
天平、烘箱、玻璃管、離心機、水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、無水乙醇、異丙醇、6mol/L鹽酸和蒸餾水。羥提取:
1.組織:稱取約0.2g樣品于玻璃管,加入2mL的組織提取液,置于110℃烘箱,水解6至12小時,用提取液定容至2mL,12000g,25℃,離心20min,取上清待測。2.細胞:取約500萬個細胞,加入1mL的細胞提取液,于高壓器中15磅保持30min,自然降壓后待測。
3.血清游離羥提取:取0.1mL血清,加入0.5mL無水乙醇使蛋白質沉淀,8000g4℃離心5min。將上清倒入另一個EP管,氮吹或沸水浴將乙醇揮發干。冷卻后再加入0.2mL50%異丙醇,充分溶解混勻待測。
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